Poliovirüs Kimlik Parçacık Aglütinasyon Yöntemi
Summary
Poliovirus (PV) virüs alıcı molekül kullanan son zamanlarda geliştirilen bir roman partikül aglütinasyon (PA) tahlil hızlı ve kolay bir kimlik izin verdi. Bu makalede, biz PA PV kimlik tayini için prosedür gösterecektir.
Abstract
Küresel Polio Eradikasyon Girişimi, laboratuvar tanısı, akut flask paralizi (AFP) vakalarının dışkı örneklerinden izole edilip tanımlanması PV kritik bir rol oynamaktadır. Dünya Sağlık Örgütü (WHO) Küresel Polio Laboratuvarı Network, PV izolasyon ve tanımlama şu anda sırasıyla hücre kültürü sistemi ve gerçek zamanlı RT-PCR kullanılarak yapılmaktadır. PV-eradikasyonu sonrası çağda, basit ve hızlı bir şekilde tespit işlemleri ulusal laboratuvarlar çocuk felci vakalarının hızlı onay için yararlı olacaktır. Bu çalışmada, biz PV tanımlanması için geliştirilen roman PA testinin prosedürü gösterecektir. Bu PA testi PV reseptör (PVR) molekülü ve PV tüm serotipleri belirli ve düzgün bir benzeşme virion etkileşimi kullanmaktadır. İşlem son derece basittir (reaksiyon plakalar bir adım prosedürü) ve hızlı (sonuçlar reaksiyon 2 saat içinde elde edilebilir), ve sonuç görsel (jelatin parçacıkların aglütinasyon gözlem) görülmektedir.
Protocol
Discussion
Bu PA testinin benzersiz bakış PV 2 tespiti için anti-PV antikor PVR molekülünün yerine kullanılmasıdır. Bu PV 3-6 üç serotipe düzgün bir yakınlığa sahip PV ile sensitize jelatin parçacıklar belirli bir etkileşim sağlar. PVR monomerik formları virion tek bağlayıcı site sadece orta yakınlık (~ -8 M 10 -7 asitlik sabiti) 7 çünkü, jelatin parçacıklar hassasiyete PVR immunoadhesin formu (PVR IgG2a) 8 ve başarıyla PV izolatların sensitiz…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Junko Wada Biz onu mükemmel teknik yardım için teşekkür ediyoruz. Prof Akio Nomoto PVR-IgG2a için nazik bir bakülovirüs ifade vektör sağlamak için minnettarız. Bu çalışma kısmen desteklenen Hibeler Yardım Polio Eradikasyon Tanıtım ve Araştırma, Sağlık, Çalışma ve Refah Bakanlığı Emerging Infectious Diseases ve yeniden ortaya çıkan.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Sensitized-gelatin particles | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Reconstitution buffer | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Microtitration plate | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Anti-PV antibody | RIVM |
References
- World Health Organization. . Polio Laboratory Manual (4th edition) WHO/IVB/04.10. , (2004).
- Arita, M., Masujima, S., Wakita, T., Shimizu, H. Development of a particle agglutination method with soluble virus receptor for identification of poliovirus. J. Clin. Microbiol. 48, 2698-2702 (2010).
- Bibb, J. A., Witherell, G., Bernhardt, G., Wimmer, E. Interaction of poliovirus with its cell surface binding site. Virology. 201, 107-115 (1994).
- Koike, S. The poliovirus receptor protein is produced both as membrane-bound and secreted forms. Embo J. 9. , 3217-3224 (1990).
- Mendelsohn, C. Transformation of a human poliovirus receptor gene into mouse cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 83, 7845-7849 (1986).
- Mendelsohn, C. L., Wimmer, E., Racaniello, V. R. Cellular receptor for poliovirus: molecular cloning, nucleotide sequence, and expression of a new member of the immunoglobulin superfamily. Cell. 56, 855-865 (1989).
- Arita, M., Koike, S., Aoki, J., Horie, H., Nomoto, A. Interaction of poliovirus with its purified receptor and conformational alteration in the virion. J. Virol. 72, 3578-3586 (1998).
- McDermott, B. M., Rux, A. H., Eisenberg, R. J., Cohen, G. H., Racaniello, V. R. Two distinct binding affinities of poliovirus for its cellular receptor. J. Biol. Chem. 275, 23089-23096 (2000).
- Pipkin, P. A., Wood, D. J., Racaniello, V. R., Minor, P. D. Characterisation of L cells expressing the human poliovirus receptor for the specific detection of polioviruses in vitro. J. Virol. Methods. 41, 333-340 (1993).
- Avoort, H. G. v. a. n. d. e. r. Comparative study of five methods for intratypic differentiation of polioviruses. J. Clin. Microbiol. 33, 2562-2566 (1995).
- Kilpatrick, D. R. Rapid group-, serotype-, and vaccine strain-specific identification of poliovirus isolates by real-time reverse transcription-PCR using degenerate primers and probes containing deoxyinosine residues. J. Clin. Microbiol. 47, 1939-1941 (2009).
