Método de aglutinação de partículas de Identificação Poliovirus
Summary
A recentemente desenvolvida romance de partículas de aglutinação do ensaio (PA) utilizando molécula receptora vírus permitiu uma identificação rápida e fácil de poliovírus (PV). Neste artigo, vamos mostrar o procedimento para o ensaio PA para identificação PV.
Abstract
Do Global de Erradicação da Pólio, diagnóstico laboratorial desempenha um papel crítico por isolar e identificar PV a partir de amostras de fezes de paralisia flácida aguda (PFA) casos. Na Organização Mundial de Saúde (OMS) Global Polio Laboratory Network, PV isolamento e identificação estão sendo realizadas por meio do sistema de cultura celular e em tempo real de RT-PCR, respectivamente. Na era pós-erradicação do PV, procedimentos de identificação simples e rápido seria útil para rápida confirmação de casos de pólio nos laboratórios nacionais. No presente estudo, vamos mostrar o procedimento do romance de ensaio PA desenvolvidos para identificação PV. Este ensaio PA utiliza interação de PV receptor molécula (PVR) e virion que é afinidade específica e uniforme para todos os sorotipos do PV. O procedimento é simples (um procedimento passo em placas de reação) e rápido (resultados podem ser obtidos dentro de 2 h de reação), eo resultado é visualmente observados (observação de aglutinação de partículas de gelatina).
Protocol
Discussion
O único ponto deste ensaio PA é a utilização da molécula de PVR em vez de anticorpos anti-PV para a detecção de PV 2. Isso permite uma interação específica das partículas sensibilizadas gelatina com PV com uma afinidade uniforme para todos os três sorotipos do PV 3-6. Nós usamos uma forma immunoadhesin de PVR (PVR-IgG2a) para a sensibilização das partículas de gelatina, porque as formas monoméricas de PVR têm apenas afinidades moderada para o único local de ligação do vírion (constante d…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Somos gratos a Junko Wada por sua excelente assistência técnica. Somos gratos ao Prof Akio Nomoto por gentilmente fornecer um vetor de expressão de baculovírus para PVR-IgG2a. Este estudo foi apoiado em parte pela Grants-in-Aid para a Promoção da Erradicação da Pólio e Pesquisa Emergentes e Re-emergentes Doenças Infecciosas do Ministério da Saúde, Trabalho e Bem-Estar.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Sensitized-gelatin particles | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Reconstitution buffer | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Microtitration plate | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Anti-PV antibody | RIVM |
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