HLA - الإيج بناء خلايا مولدة الاصطناعي تقديم الكفء لل خارج الحي توسيع CTL الإنسان
Summary
وصفت طريقة جديدة مستقلة عن العاصمة الاستقراء وتوسيع خلايا محددة مستضد تي. يتم تحميل HLA – A2 الإيج المعتمدة على خلايا مولدة تقديم الاصطناعي (aAPC) مع HLA – A2 الببتيدات يقتصر على توسيع بكفاءة CTL من خصوصية المستضد متنوعة. هذه التكنولوجيا يحمل إمكانات كبيرة للCTL المستندة المناعي بالتبني.
Abstract
CTL مع وظيفة المستجيب الأمثل تلعب أدوارا حاسمة في التوسط في الحماية ضد الأمراض المختلفة والخلايا السرطانية. ومع ذلك ، قد يحمل الأفراد المكروية المناعي القمعية ، وعلى النقيض من تفعيل CTL ، زنزاناتهم مستضد ذاتي قد تميل إلى تقديم tolerize أو anergize CTL مستضد معين. نتيجة لذلك ، وإن كانت لا تزال في مرحلة تجريبية ، وقد تطورت على أساس CTL المناعي بالتبني لتصبح واعدة لعلاج لمختلف الأمراض مثل السرطان والالتهابات الفيروس. في التجارب الأولية التي استخدمت في خارج الجسم الموسعة CMV (المضخم للخلايا) CTL محددة للعلاج من عدوى في CMV المناعة خيفي مرضى زرع نخاع العظم. في حين أنه من الشائع أن تهدد الحياة viremia CMV في هؤلاء المرضى ، أي من المرضى الذين يتلقون توسيع CTL تطوير CMV مرض ذات الصلة ، مما يعني ضمنا تأسيس مناعة مضادة للCMV من CTL نقل adoptively 1. وتم أيضا نتائج واعدة لوحظ سرطان الجلد ، ويمكن توسيعه ليشمل أنواع أخرى من السرطان 2.
في حين أن هناك العديد من الطرق لتحفيز الجسم الحي السابقين وتوسيع CTL الإنسان ، وتقتصر المناهج الحالية من قيود التكلفة والتقنية. على سبيل المثال ، يعتمد معيار الذهب الحالي على استخدام العاصمة ذاتي. هذا يتطلب من كل مريض على التبرع بعدد كبير من الكريات البيض ، وأيضا مكلفة جدا وشاقة. وعلاوة على ذلك ، فقد كشفت تفاصيلها في توصيف المختبر من العاصمة توسيع CTL أن هذه وظيفة المستجيب الأمثل فقط 3.
هنا نقدم كفاءة عالية aAPC نظام قائم للتوسع خارج الجسم الحي من CTL CMV الإنسان محددة لعلاج مناعي بالتبني (الشكل 1). قدمت من قبل اقتران aAPC الخلية الخرز المغناطيسي الحجم مع ديمر HLA – A2 – الإيج الإنسان ومكافحة CD28mAb 4. مرة واحدة مصنوعة aAPC ، يمكن تحميلها مع الببتيدات مختلف المصالح ، ويظل ساريا لمدة شهور. في هذا التقرير ، تم تحميلها aAPC مع الببتيد المهيمنة من CMV ، pp65 (NLVPMVATV). بعد زرع النقي الإنسان CD8 + CTL من متبرع صحية مع aAPC لمدة أسبوع ، ويمكن زيادة CMV CTL محددة بشكل كبير في نوعية ما يصل الى 98 ٪ (الشكل 2) وتضخيمها أكثر من 10000 مرة. إذا كانت مطلوبة أكثر CMV CTL محددة ، ويمكن تحقيق مزيد من التوسع بسهولة عن طريق التحفيز المتكرر مع aAPC. توصيف المظهري وظيفية تظهر هذه الخلايا لديها ذاكرة موسعة المستجيب النمط الظاهري ، وجعل كميات كبيرة من كلا TNFα وIFNγ (الشكل 3).
Protocol
Discussion
نظام aAPC وصفنا هنا هو وجود نظام فعال للتوسع خارج الجسم الحي من CTL الإنسان ضد مجموعة متنوعة من مولدات المضادات. يجب توخي الحذر خاصة فيما يتعلق بنوعية تصريف البروتين والتوزيع حتى aAPC CTL والثقافة في لوحة 96 – جيدا. باستخدام هذا النهج كنا قادرين على توسيع CTL لأكثر من 8 أسابيع ، حيث نجحنا في توسيع مستضد محددة CTL يصل الى 4 ملايين أضعاف. كانت هناك عدة نظم APC الاصطناعية التي تستخدم خطوط الخلايا أو غيرها من المنصات ديكي 5 ، ولكن وفقا لبيانات نشرت كل نظام ومكانتها الفريدة في ما يتعلق بتوسيع ودعم التطبيقات خصوصية مختلفة. الأهم ، لأن نوعية CTL لا يقل أهمية عن الكمية ، ومن المتوقع أن polyfunctionality من CTL CMV الخاصة التي تم إنشاؤها بواسطة نظامنا للتشاور متفوقة المضادة للفيروسات الكفاءة.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نود أن نشكر هارون Selya للمناقشة مفيدة. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح AI29575 ، CA108835 ، AI077097 لشبيبة ، ومنحة رائدة من جامعة جونز هوبكنز ومعهد أبحاث الملاريا في وزارة الدفاع لمنح PC 040972 MO
Materials
| Reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| Vacutainer tube (contains heparin) | Becton Dickinson | 367874 |
| Human CD8+ T cell isolation kit | Miltenyi | 130-094-156 |
| Dynabeads M-450 Epoxy | Invitrogen | 140.11 |
| Dynal MPC-1 Magnet | Invitrogen | 120-01D |
| Ficoll-Paque Plus | GE healthcare | 17-1440-03 |
| RPMI medium 1640 | Gibco | 11875 |
| HLA-A2-Ig dimer X | Becton Dickinson | 551263 |
| iTAgMHC tetramer (HLA-A2-CMV)-PE | Beckman Coulter | T20099 |
| Falcon clear 96-well Microtest plate | Becton Dickinson | 353077 |
| Rat anti-mouse IgG2a-FITC | Becton Dickinson | 553390 |
| Goat anti-mouse IgG1-PE | Invitrogen | P21129 |
| Human serum type AB | Atlanta biologicals | S40110 |
| Mouse anti-human CD8a-FITC | Sigma-Aldrich | F0772 |
| Mouse anti-human CD8a-APC | Becton Dickinson | 340684 |
| Mouse anti-human IFNγ-FITC | Becton Dickinson | 340449 |
| Mouse anti-human TNFα-PE | Becton Dickinson | 340512 |
References
- Walter, E. A. Reconstitution of cellular immunity against cytomegalovirus in recipients of allogeneic bone marrow by transfer of T-cell clones from the donor. N Engl J Med. 333, 1038-1038 (1995).
- Rosenberg, S. A. Adoptive cell transfer: a clinical path to effective cancer immunotherapy. Nat Rev Cancer. 8, 3669-3669 (2008).
- Oelke, M. Ex vivo induction and expansion of antigen-specific cytotoxic T cells by HLA-Ig-coated artificial antigen-presenting cells. Nat Med. 9, 619-619 (2003).
- Oelke, M. Artificial antigen-presenting cells: artificial solution for real diseases. Trends Mol Med. 11, 412-412 (2005).
