Trichuris muris infección: un modelo de tipo 2 inmunidad y la inflamación en el intestino
Summary
Trichuris muris infección intestinal es un modelo de la inmunidad Th2 en ratones resistentes al generar una respuesta Th2 protección y ratones susceptibles de generar una respuesta Th1 patológicos.
Abstract
Trichuris muris es un patógeno natural de los ratones y es biológicamente y antigénicamente similares a las especies de Trichuris que infectan a los seres humanos y animales 1. Los huevos infectantes se dan mediante una sonda nasogástrica, eclosionan en el intestino delgado distal, invaden las células epiteliales intestinales (IEC) que la línea de las criptas del ciego y el colon proximal y en la maduración de los huevos de los gusanos liberación en el medio ambiente 1. Este modelo es una herramienta poderosa para examinar los factores que las células CD4 + de control T helper (Th) activación de las células, así como cambios en el epitelio intestinal. La respuesta inmune que se produce en las cepas endogámicas, como C57BL / 6 y BALB / c, se caracteriza por las citocinas Th2 polarizadas (IL-4, IL-5 e IL-13) y la expulsión de los gusanos, mientras que Th1 asociada a las citocinas (IL -12, IL-18, IFN-γ) promover las infecciones crónicas en AKR genéticamente susceptibles / J ratones 2-6. Citocinas Th2 promover cambios fisiológicos en el microambiente intestinal incluyendo la rápida rotación de la IEC, la diferenciación de las células caliciformes, la contratación y cambios en la permeabilidad del epitelio y la contracción del músculo liso, que se han implicado en la expulsión del gusano 7.15. Aquí detallamos un protocolo para la propagación de los huevos de Trichuris muris que puede ser utilizado en experimentos posteriores. También proporcionamos una pesca experimental de la muestra con sugerencias para el análisis post-infección. En términos generales, este protocolo se proporcionará a los investigadores con las herramientas básicas para realizar una Trichuris muris ratón modelo de infección que puede ser utilizado para tratar las cuestiones relacionadas con proclividad Th en el tracto gastrointestinal, así como funciones efectoras inmunes de la IEC.
Protocol
Discussion
Este protocolo detalla un estándar de alta dosis aguda de la infección por Trichuris muris que pueden ser modificados según sea necesario por el investigador. Por ejemplo, los ratones pueden ser sacrificados y tejidos recolectados en días diferentes. Para determinar que los ratones han establecido con éxito la carga del gusano completo que puede ser sacrificado en el día 14, momento en el que todos los ratones que llevan una carga de aproximadamente 200 gusanos. Los ratones también pueden ser infectados …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue financiado por los Institutos Canadienses de Investigación en Salud (MSH-95368, 89773 y MOP-MOP-106623 a la República Checa) y la Fundación Canadiense para la Innovación. SCM es el destinatario de una Asociación de CIHR / canadiense de la comunión Gastroenterología postdoctoral. CZ es un investigador de Nueva CIHR.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Animal Feeding Needles (18 x 1½”) | Popper | 7912 | |
| Smooth curved Forceps | Roboz | RS-5047 | |
| DMEM | Gibco | 11965 | |
| NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) | Jackson Laboratories | 005557 | These are the mice we used, however, any immunodeficient mice or susceptible strain should work. |
| RNAlater | Qiagen | 76104 | |
| 2 ml tubes | Axygen | MCT-200-C | |
| 15 ml tubes | Falcon | 352096 | |
| 6 well plates | Falcon | 353046 | |
| Paraformaldehyde | Electron Microscopy Science | 15710 | |
| α-RELMβ antibody | PeproTech Inc | 0694270Rb |
References
- Cliffe, L. J., Grencis, R. K. The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection. Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).
- Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. Cytokine-mediated regulation of chronic intestinal helminth infection. J. Exp. Med. 179, 347-351 (1994).
- Bancroft, A. J., Grencis, R. K. Th1 and Th2 cells and immunity to intestinal helminths. Chem. Immunol. 71, 192-208 (1998).
- Bancroft, A. J., McKenzie, A. N., Grencis, R. K. A critical role for IL-13 in resistance to intestinal nematode infection. J. Immunol. 160, 3453-3461 (1998).
- Helmby, H., Takeda, K., Akira, S., Grencis, R. K. Interleukin (IL)-18 promotes the development of chronic gastrointestinal helminth infection by downregulating IL-13. J. Exp. Med. 194, 355-364 (2001).
- Owyang, A. M. Interleukin 25 regulates type 2 cytokine-dependent immunity and limits chronic inflammation in the gastrointestinal tract. J. Exp. Med. 203, 843-849 (2006).
- Artis, D. RELMβ/FIZZ2 is a goblet cell-specific immune-effector molecule in the gastrointestinal tract. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 13596-13600 (2004).
- Datta, R. Identification of novel genes in intestinal tissue that are regulated after infection with an intestinal nematode parasite. Infect. Immun. 73, 4025-4033 (2005).
- Cliffe, L. J. Accelerated intestinal epithelial cell turnover: a new mechanism of parasite expulsion. Science. 308, 1463-1465 (2005).
- Artis, D. New weapons in the war on worms: identification of putative mechanisms of immune-mediated expulsion of gastrointestinal nematodes. Int. J. Parasitol. 36, 723-733 (2006).
- Finkelman, F. D. Cytokine regulation of host defense against parasitic gastrointestinal nematodes: lessons from studies with rodent models. Annu. Rev. Immunol. 15, 505-533 (1997).
- Grencis, R. K. Enteric helminth infection: immunopathology and resistance during intestinal nematode infection. Chem. Immunol. 66, 41-61 (1997).
- Khan, W. I. Modulation of intestinal muscle contraction by interleukin-9 (IL-9) or IL-9 neutralization: correlation with worm expulsion in murine nematode infections. Infect. Immun. 71, 2430-2438 (2003).
- Khan, W. I., Blennerhasset, P., Ma, C., Matthaei, K. I., Collins, S. M. Stat6 dependent goblet cell hyperplasia during intestinal nematode infection. Parasite Immunol. 23, 39-42 (2001).
- Akiho, H., Blennerhassett, P., Deng, Y., Collins, S. M. Role of IL-4, IL-13, and STAT6 in inflammation-induced hypercontractility of murine smooth muscle cells. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282, 226-2232 (2002).
- Kopper, J. J., Mansfield, L. S. Development of improved methods for delivery of Trichuris muris to the laboratory mouse. Parasitol. Res. 107, 1103-1113 (2010).
- Bancroft, A. J., Else, K. J., Grencis, R. K. Low-level infection with Trichuris muris significantly affects the polarization of the CD4 response. Eur. J. Immunol. 24, 3113-3118 (1994).
