Trichuris Muris Infezione: un modello di tipo 2 Immunità e infiammazione nell'intestino
Summary
Trichuris infezione Muris è un modello di immunità intestinale Th2 dove topi resistenti generare una risposta protettiva Th2 e topi suscettibili generare una patologica risposta Th1.
Abstract
Trichuris Muris è un patogeno naturale di topi ed è biologicamente e antigenicamente simili alle specie di Trichuris che infettano gli esseri umani e animali 1. Uova infette sono dati mediante sonda gastrica, schiudono nel piccolo intestino distale, invadono le cellule epiteliali intestinali (IXC) che la linea di cripte del cieco e del colon prossimale e alla maturazione dei worm rilasciare le uova nell'ambiente 1. Questo modello è uno strumento potente per esaminare i fattori che controllo CD4 + T helper (Th) l'attivazione delle cellule così come i cambiamenti a livello dell'epitelio intestinale. La risposta immunitaria che si verifica in ceppi inbred, come C57BL / 6 e BALB / c, è caratterizzato da citochine Th2 polarizzata (IL-4, IL-5 e IL-13) e l'espulsione di vermi, mentre associata citochine Th1 (IL -12, IL-18, IFN-γ) promuovere le infezioni croniche in AKR geneticamente suscettibili / topi J 2-6. Citochine Th2 promuovere cambiamenti fisiologici nel microambiente intestinale compreso rapido turnover di IXC, la differenziazione delle cellule caliciformi, di reclutamento e cambiamenti della permeabilità epiteliale e la contrazione della muscolatura liscia, che sono stati implicati in espulsione verme 7-15. Qui dettaglio un protocollo per la propagazione Trichuris uova Muris, che possono essere utilizzati in esperimenti successivi. Forniamo anche un raccolto sperimentale campione con suggerimenti per l'analisi post-infezione. Nel complesso, questo protocollo fornirà ai ricercatori gli strumenti di base per eseguire un mouse Trichuris Muris modello di infezione che può essere utilizzata per affrontare questioni relative alla propensione Th nel tratto gastrointestinale e immunitario funzioni effettrici delle IXC.
Protocol
Discussion
Questo protocollo dettagli di un elevato standard dose acuta di infezione Trichuris Muris, che può essere modificato come richiesto dallo sperimentatore. Per esempio, i topi possono essere sacrificati e tessuti raccolti in giorni diversi. Per determinare che i topi hanno stabilito con successo pieno carico vermi possono essere sacrificati al giorno 14, momento in cui tutti i mouse dovrebbe portare un peso di circa 200 vermi. I topi possono anche essere infettati per 32 giorni in cui ogni verme rilevato avrà r…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto dal Canadian Institutes of Health Research (MSH-95368, 89773 e-MOP MOP-106623 a CZ) e la Fondazione canadese per l'innovazione. SCM è il destinatario di un CIHR / Canadian Association of Gastroenterology borsa post-dottorato. CZ è un investigatore CIHR Nuovo.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Animal Feeding Needles (18 x 1½”) | Popper | 7912 | |
| Smooth curved Forceps | Roboz | RS-5047 | |
| DMEM | Gibco | 11965 | |
| NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) | Jackson Laboratories | 005557 | These are the mice we used, however, any immunodeficient mice or susceptible strain should work. |
| RNAlater | Qiagen | 76104 | |
| 2 ml tubes | Axygen | MCT-200-C | |
| 15 ml tubes | Falcon | 352096 | |
| 6 well plates | Falcon | 353046 | |
| Paraformaldehyde | Electron Microscopy Science | 15710 | |
| α-RELMβ antibody | PeproTech Inc | 0694270Rb |
References
- Cliffe, L. J., Grencis, R. K. The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection. Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).
- Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. Cytokine-mediated regulation of chronic intestinal helminth infection. J. Exp. Med. 179, 347-351 (1994).
- Bancroft, A. J., Grencis, R. K. Th1 and Th2 cells and immunity to intestinal helminths. Chem. Immunol. 71, 192-208 (1998).
- Bancroft, A. J., McKenzie, A. N., Grencis, R. K. A critical role for IL-13 in resistance to intestinal nematode infection. J. Immunol. 160, 3453-3461 (1998).
- Helmby, H., Takeda, K., Akira, S., Grencis, R. K. Interleukin (IL)-18 promotes the development of chronic gastrointestinal helminth infection by downregulating IL-13. J. Exp. Med. 194, 355-364 (2001).
- Owyang, A. M. Interleukin 25 regulates type 2 cytokine-dependent immunity and limits chronic inflammation in the gastrointestinal tract. J. Exp. Med. 203, 843-849 (2006).
- Artis, D. RELMβ/FIZZ2 is a goblet cell-specific immune-effector molecule in the gastrointestinal tract. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 13596-13600 (2004).
- Datta, R. Identification of novel genes in intestinal tissue that are regulated after infection with an intestinal nematode parasite. Infect. Immun. 73, 4025-4033 (2005).
- Cliffe, L. J. Accelerated intestinal epithelial cell turnover: a new mechanism of parasite expulsion. Science. 308, 1463-1465 (2005).
- Artis, D. New weapons in the war on worms: identification of putative mechanisms of immune-mediated expulsion of gastrointestinal nematodes. Int. J. Parasitol. 36, 723-733 (2006).
- Finkelman, F. D. Cytokine regulation of host defense against parasitic gastrointestinal nematodes: lessons from studies with rodent models. Annu. Rev. Immunol. 15, 505-533 (1997).
- Grencis, R. K. Enteric helminth infection: immunopathology and resistance during intestinal nematode infection. Chem. Immunol. 66, 41-61 (1997).
- Khan, W. I. Modulation of intestinal muscle contraction by interleukin-9 (IL-9) or IL-9 neutralization: correlation with worm expulsion in murine nematode infections. Infect. Immun. 71, 2430-2438 (2003).
- Khan, W. I., Blennerhasset, P., Ma, C., Matthaei, K. I., Collins, S. M. Stat6 dependent goblet cell hyperplasia during intestinal nematode infection. Parasite Immunol. 23, 39-42 (2001).
- Akiho, H., Blennerhassett, P., Deng, Y., Collins, S. M. Role of IL-4, IL-13, and STAT6 in inflammation-induced hypercontractility of murine smooth muscle cells. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282, 226-2232 (2002).
- Kopper, J. J., Mansfield, L. S. Development of improved methods for delivery of Trichuris muris to the laboratory mouse. Parasitol. Res. 107, 1103-1113 (2010).
- Bancroft, A. J., Else, K. J., Grencis, R. K. Low-level infection with Trichuris muris significantly affects the polarization of the CD4 response. Eur. J. Immunol. 24, 3113-3118 (1994).
