المسلكة الفأرية العدوى : نموذج من الحصانة من النوع 2 والتهاب في القناة الهضمية
Summary
المسلكة الفأرية العدوى المعوية هو نموذج الحصانة TH2 حيث توليد فئران مقاومة للاستجابة وقائية TH2 والفئران عرضة توليد المرضية TH1 الاستجابة.
Abstract
المسلكة الفأرية هو الممرض من الفئران الطبيعية والبيولوجية ومستضديا مشابهة نوعا من المسلكة التي تصيب البشر والحيوانات 1. تعطى البيض بالتزقيم المعدية عن طريق الفم ، يفقس في الأمعاء الصغيرة البعيدة ، غزو الخلايا الظهارية في الأمعاء (IECS) التي تبطن الخبايا من الأعور والقولون والداني على نضوج الديدان الإفراج البيض في البيئة 1. هذا النموذج هو أداة قوية لدراسة العوامل التي تحكم CD4 + T تنشيط الخلايا المساعد (ث) ، وكذلك تغييرات في ظهارة الأمعاء. وتتميز الاستجابة المناعية التي تحدث في سلالات مقاومة الفطرية ، مثل C57BL / 6 و BALB / ج ، من خلال الاستقطاب السيتوكينات TH2 (IL – 4 ، IL – 5 و IL – 13) وطرد الديدان بينما TH1 المرتبطة السيتوكينات (IL -12 ، IL – 18 ، IFN – γ) تعزيز الالتهابات المزمنة في عكر عرضة وراثيا / الفئران J 2-6. السيتوكينات TH2 تعزيز التغيرات الفسيولوجية في المكروية المعوية بما في ذلك سرعة دوران IECS ، القدح تمايز الخلايا ، والتوظيف ، والتغيرات في نفاذية الظهارية وسلس تقلص العضلات ، والتي تورطت في طرد الدودة 7-15. نحن هنا بالتفصيل بروتوكولا لنشر المسلكة الفأرية البيض والتي يمكن استخدامها في التجارب اللاحقة. ونحن نقدم أيضا عينة تجريبية الحصاد مع اقتراحات لمرحلة ما بعد الإصابة التحليل. عموما ، سوف توفر للباحثين هذا البروتوكول مع الأدوات الأساسية لتنفيذ ماوس الفأرية المسلكة نموذج العدوى التي يمكن استخدامها لمعالجة المسائل المتعلقة الميل ث في الجهاز الهضمي فضلا عن وظائف المناعة في IECS المستجيب.
Protocol
Discussion
تفاصيل هذا البروتوكول معيار جرعة عالية العدوى الحادة الفأرية المسلكة التي يمكن تعديلها على النحو المطلوب من قبل المحقق. على سبيل المثال ، يمكن التضحية وأنسجة الفئران التي تحصد في أيام مختلفة. يمكن أن تقرر أن الفئران قد أنشأت بنجاح كامل عبء دودة يمكن التضحية أنه?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الكندية لأبحاث الصحة (MSH – 95368 ، 89773 وMOP – MOP – 106623 لتشيكوسلوفاكيا) ، والمؤسسة الكندية للإبداع. SCM هو المستفيد من جمعية CIHR / الكندي للزمالة أمراض الجهاز الهضمي ما بعد الدكتوراه. CZ هو محقق CIHR جديد.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Animal Feeding Needles (18 x 1½”) | Popper | 7912 | |
| Smooth curved Forceps | Roboz | RS-5047 | |
| DMEM | Gibco | 11965 | |
| NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) | Jackson Laboratories | 005557 | These are the mice we used, however, any immunodeficient mice or susceptible strain should work. |
| RNAlater | Qiagen | 76104 | |
| 2 ml tubes | Axygen | MCT-200-C | |
| 15 ml tubes | Falcon | 352096 | |
| 6 well plates | Falcon | 353046 | |
| Paraformaldehyde | Electron Microscopy Science | 15710 | |
| α-RELMβ antibody | PeproTech Inc | 0694270Rb |
References
- Cliffe, L. J., Grencis, R. K. The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection. Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).
- Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. Cytokine-mediated regulation of chronic intestinal helminth infection. J. Exp. Med. 179, 347-351 (1994).
- Bancroft, A. J., Grencis, R. K. Th1 and Th2 cells and immunity to intestinal helminths. Chem. Immunol. 71, 192-208 (1998).
- Bancroft, A. J., McKenzie, A. N., Grencis, R. K. A critical role for IL-13 in resistance to intestinal nematode infection. J. Immunol. 160, 3453-3461 (1998).
- Helmby, H., Takeda, K., Akira, S., Grencis, R. K. Interleukin (IL)-18 promotes the development of chronic gastrointestinal helminth infection by downregulating IL-13. J. Exp. Med. 194, 355-364 (2001).
- Owyang, A. M. Interleukin 25 regulates type 2 cytokine-dependent immunity and limits chronic inflammation in the gastrointestinal tract. J. Exp. Med. 203, 843-849 (2006).
- Artis, D. RELMβ/FIZZ2 is a goblet cell-specific immune-effector molecule in the gastrointestinal tract. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 13596-13600 (2004).
- Datta, R. Identification of novel genes in intestinal tissue that are regulated after infection with an intestinal nematode parasite. Infect. Immun. 73, 4025-4033 (2005).
- Cliffe, L. J. Accelerated intestinal epithelial cell turnover: a new mechanism of parasite expulsion. Science. 308, 1463-1465 (2005).
- Artis, D. New weapons in the war on worms: identification of putative mechanisms of immune-mediated expulsion of gastrointestinal nematodes. Int. J. Parasitol. 36, 723-733 (2006).
- Finkelman, F. D. Cytokine regulation of host defense against parasitic gastrointestinal nematodes: lessons from studies with rodent models. Annu. Rev. Immunol. 15, 505-533 (1997).
- Grencis, R. K. Enteric helminth infection: immunopathology and resistance during intestinal nematode infection. Chem. Immunol. 66, 41-61 (1997).
- Khan, W. I. Modulation of intestinal muscle contraction by interleukin-9 (IL-9) or IL-9 neutralization: correlation with worm expulsion in murine nematode infections. Infect. Immun. 71, 2430-2438 (2003).
- Khan, W. I., Blennerhasset, P., Ma, C., Matthaei, K. I., Collins, S. M. Stat6 dependent goblet cell hyperplasia during intestinal nematode infection. Parasite Immunol. 23, 39-42 (2001).
- Akiho, H., Blennerhassett, P., Deng, Y., Collins, S. M. Role of IL-4, IL-13, and STAT6 in inflammation-induced hypercontractility of murine smooth muscle cells. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282, 226-2232 (2002).
- Kopper, J. J., Mansfield, L. S. Development of improved methods for delivery of Trichuris muris to the laboratory mouse. Parasitol. Res. 107, 1103-1113 (2010).
- Bancroft, A. J., Else, K. J., Grencis, R. K. Low-level infection with Trichuris muris significantly affects the polarization of the CD4 response. Eur. J. Immunol. 24, 3113-3118 (1994).
