Протокол для сбора и окрашивания гемоциты от желтой лихорадки комаров Aedes aegypti</em

Комары являются переносчиками для целого ряда болезнетворных патогенов, таких как вирус желтой лихорадки, малярии паразиты и филяриатозных червей. Лаборатории проводят расследование против патогенных компонентов иммунной системы в переносчиками болезней видов в надежде получения трансгенных комаров, которые поддаются таких патогенов ^{1, 2.} Врожденной иммунной системы комаров состоит из нескольких линий защиты ^3. Патогенные микроорганизмы, которые удается бежать барьер введенные эпителия картонных комаров кишки ⁴ введите гемолимфы и сталкиваются с циркулирующим гемоциты, важные клеточные компоненты, которые инкапсулируют и поглотит патогенов ^{5, 6.} Ученые не нашли доказательств кроветворной ткани в комаров и текущие данные свидетельствуют о том, что количество гемоцитов зафиксирована на уровне взрослых возникновение и цифры могут на самом деле падение, как комар возрасте от ^7. Умение правильно собрать и идентифицировать гемоциты из медицинской важных насекомых является важным шагом для исследований в клеточный иммунитет. Тем не менее, небольшой размер комаров и ограниченного объема гемолимфы создать проблему для сбора клеток иммунной системы.

Две организованные методы сбора комаров гемоциты включают изгнание из гемолимфы сократить хоботок ^8, и объема перемещения (перфузии), в котором солевой вводится в мембранных necklike области между головой и грудной клетки (например, шейки матки) и перфузии гемолимфы собирается из разорванной открытия в дистальной части брюшной полости ^{9, 10.} Эти методы, однако, ограничиваются низкой восстановления гемоцитов и возможного загрязнения жировыми клетками тела, соответственно ^11. Совсем недавно метода называют высокий инъекции / восстановления обеспечивают быстрое восстановление иммуноцитов с использованием антикоагулянта буферов при одновременном снижении уровня загрязнения масштабов и внутренних тканей ^11. Хотя этот метод позволяет усовершенствованный метод сбора и хранения гемоциты для первичной культуры, оно влечет за собой ряд впрыска и сбора шаги, которые не нужны, если вниз по течению целью является сбор, фиксация и пятно гемоциты для диагностики. Здесь мы демонстрируем наш метод сбора комаров гемолимфы, что сочетает в себе простоту перфузии, используя антикоагулянта буферы вместо физиологического раствора, с точностью высокотехнологичной техники инъекции, чтобы изолировать чистые препараты гемоциты в Aedes комаров.