Um Protocolo de Coleta e coloração Hemócitos do mosquito da febre amarela Aedes aegypti</em

Os mosquitos são vetores de uma série de patógenos causadores de doenças como o vírus da febre amarela, malária e parasitas worms filarial. Laboratórios estão investigando anti-patógeno componentes do sistema imune inato na espécie dos vectores de doenças, na esperança de gerar mosquitos transgênicos que são refratários à patógenos, ^{1, 2.} O sistema imune inato de mosquitos consiste de vários mecanismos de defesa ^3. Patógenos que conseguem escapar da barreira imposta pelo mosquito epitélio do intestino médio-lined ⁴ entrar na hemolinfa e encontrar hemócitos circulantes, importantes componentes celulares que sintetizam e patógenos engulf ^{5, 6.} Os pesquisadores não encontraram evidências de tecido hematopoiético em mosquitos e evidência atual sugere que o número de hemócitos é fixada em emergência de adultos e os números podem realmente diminuir com a idade mosquito ^7. A habilidade para recolher e identificar hemócitos de insetos de importância médica é um passo essencial para os estudos da imunidade celular. No entanto, o pequeno tamanho dos mosquitos e do volume limitado de hemolinfa representam um desafio para coleta de células do sistema imunológico.

Dois métodos estabelecidos para a recolha de hemócitos mosquito incluem a expulsão de hemolinfa a partir de uma tromba de corte ^8, e deslocamento de volume (perfusão), em que solução salina é injetada na região membranosa necklike entre a cabeça eo tórax (ie, colo do útero) ea hemolinfa perfundidos é coletada a partir de uma abertura rasgada em uma região distal do abdômen ^{9, 10.} Estas técnicas, no entanto, são limitados pela baixa recuperação de hemócitos e possível contaminação por células de gordura corporal, respectivamente ^11. Mais recentemente, um método conhecido como recuperação de injecção / alta recuperação melhorada de imunócitos pelo uso de buffers anticoagulante, reduzindo os níveis de escalas de contaminantes e tecidos internos ^11. Enquanto que o método permite um método melhorado de coleta e manutenção hemócitos para cultura primária, envolve uma série de injeção e as etapas de coleta que não são necessárias se o objetivo é coletar a jusante, corrigir e mancha hemócitos para diagnósticos. Aqui, demonstramos o nosso método de coleta de hemolinfa mosquito que combina a simplicidade de perfusão, usando buffers anticoagulante em lugar de solução salina, com a precisão das técnicas de injecção de alta para isolar os preparativos limpa de hemócitos em mosquitos Aedes.