Een protocol voor het verzamelen en Kleuring Hemocytes uit de Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti</em

Muggen zijn vectoren voor een aantal ziekteverwekkende pathogenen, zoals de gele koorts virus, malaria parasieten en filaria wormen. Laboratoria onderzoeken anti-pathogeen componenten van het aangeboren immuunsysteem bij de ziekte van vectorsoorten in de hoop van het genereren van transgene muggen die ongevoelig zijn voor een dergelijke pathogenen ^{1, 2.} Het aangeboren immuunsysteem van muggen bestaat uit verschillende lijnen van de verdediging ^3. Pathogenen die erin slagen om de barrière opgelegd door de epitheel-omzoomde muggen middendarm ⁴ te ontsnappen gaan de hemolymfe en ontmoeting circulerende hemocytes, belangrijke cellulaire componenten die in te kapselen en verzwelgen pathogenen ^{5, 6.} Onderzoekers hebben geen bewijs gevonden voor hematopoietische weefsels in de muggen en de huidige gegevens wijzen erop dat het aantal hemocytes is vastgesteld op volwassen opkomst en het aantal kan zelfs afnemen als de mug leeftijd ^7. Het vermogen om goed te verzamelen en te identificeren hemocytes van medisch belangrijke insecten is een essentiële stap voor studies in de cellulaire immuniteit. Echter, de geringe omvang van muggen en de beperkte volume van hemolymfe vormen een uitdaging voor het verzamelen van immuuncellen.

Twee gevestigde methoden voor het verzamelen muggen hemocytes zijn uitzetting van hemolymfe van een snee slurf ^8, en het volume verplaatsing (perfusie), waarin de zoutoplossing wordt in de vliezige necklike gebied geïnjecteerd tussen de kop en de thorax (dat wil zeggen, cervix) en de geperfuseerde hemolymfe wordt verzameld uit een gescheurde opening in een distale regio van de buik ^{9, 10.} Deze technieken zijn echter beperkt door de lage herstel van de hemocytes en mogelijke vervuiling door vet lichaamscellen, respectievelijk ^11. Meer recent een methode aangeduid als high injectie / herstel verbeterde terugvordering van de immunocytes door het gebruik van anticoagulantia buffers terwijl het verminderen van het niveau van verontreinigende schalen en de interne weefsels ^11. Terwijl die methode zorgt voor een verbeterde methode voor het verzamelen en onderhouden van hemocytes voor de primaire cultuur, het betekent een aantal van de injectie en het verzamelen van stappen die niet nodig zijn als de stroomafwaartse doel is het verzamelen, repareren en vlek hemocytes voor de diagnostiek. Hier tonen we onze methode voor het verzamelen van muggen hemolymfe dat de eenvoud van perfusie gecombineerd, met behulp van anti-stollingsmiddel buffers in plaats van een zoutoplossing, met de nauwkeurigheid van de hoge injectie technieken om schoon voorbereidingen van hemocytes in Aedes muggen te isoleren.