組換え可溶性GM - CSF受容体を用いてGM - CSF抗体の中和能を推定する無細胞アッセイシステム

背景：これまで、我々はその中和能を示したが、GM – CSF自己抗体の濃度は、自己免疫性肺肺胞タンパク症^（PAP）1-3患者の疾患の重症度と相関していたではない。肺におけるGM – CSFの生物活性の廃止は^、4,5自己免疫PAPの可能性が高い原因であるとして、それはPAPと各患者の病気の重症度を評価するためのGM – CSF自己抗体の中和能を測定するために期待される。

今までは、GM – CSF自己抗体の中和能は、ヒト骨髄細胞またはGM – CSF ^6月8日で刺激TF – 1細胞の増殖阻害を評価することによって評価されている。バイオアッセイ系では、しかしながら、一定の条件で細胞を維持するための技術的な問題に起因する別の研究室からのデータを、比較するだけでなく、信頼性の高いデータを得るためにしばしば問題になります。

目的：無細胞受容体結合アッセイを用いて細胞表面にGM – CSF受容体に結合するGM – CSFを模倣する。

方法：トランスジェニックカイコ技術は、高純度^9月13日に組換え可溶性GM – CSF受容体α（sGMRα）のための大規模な量を得るために適用した。組換えsGMRαは、絹のタンパク質に融合されることなく、絹の糸の親水性のセリシン層に含まれていた、従って、我々は容易に中性の水溶液^14,15との良好な純度で繭から抽出することができます。幸いなことに、GM – CSFとの結合に不可欠なオリゴ糖の構造は、他の昆虫や酵母によって生成されるものよりも人間のsGMRαの構造に、より類似しています。

結果：無細胞アッセイ系sGMRαを使用しては高い可塑性と信頼性でデータが得られた。 sGMRαにGM – CSF結合を用量依存sGMRαを使って、新しい無細胞アッセイ系は、中和活性の測定のためのより有用であることを示す、TF – 1細胞​​を用いたバイオアッセイと同様の方法でポリクローナルGM – CSF自己抗体によって阻害されたTF – 1細胞​​またはヒト骨髄細胞を用いたバイオアッセイ系よりGM – CSF自己抗体の。

結論：我々はGM – CSF自己抗体の中和能を定量化する無細胞アッセイを確立した。