Ex Vivo התרבות של האדם תאים ראשוניים החצוצרה אפיתל
Summary
החצוצרה (FT) מתגלה כאתר חלופי ממוצא עבור סרטן השחלות הצפק (SOC). פרוטוקול זה מתאר שיטה חדשה בידוד ו<em> לשעבר vivo</em> התרבות של תאים החצוצרה אפיתל. מערכת זו משחזר<em> In vivo</em> האפיתל, ומאפשר את לימוד בפתוגנזה SOC.
Abstract
סרטן השחלות אפיתל היא הגורם המוביל לתמותה מסרטן נשי בארצות הברית. בניגוד לנשים ספציפיים סרטן אחרים, כמו השד קרצינומה של הרחם, כאשר שיעור התמותה ירדו בשנים האחרונות, שיעורי ריפוי סרטן השחלות נותרו ללא שינוי יחסית לאורך שני העשורים האחרונים 1. זה נובע במידה רבה מחוסר כלים ההקרנה המתאים לגילוי המחלה בשלב מוקדם בו ניתוח וכימותרפיה הם יעילים ביותר 2, 3. כתוצאה מכך, רוב המטופלים עם מחלה בשלב הנוכחי מתקדמים מעורבות הבטן מפוזר. זה מסתבך עוד יותר בשל העובדה סרטן השחלות היא מחלה הטרוגנית עם תת היסטולוגית מספר 4, 5. סרטן שחלות נסיובי (SOC) הוא תת הנפוצים ביותר אגרסיבי הטופס הקשורים לרוב עם מוטציות בגנים BRCA. מודלים ניסיוניים מקומי בתחום זה כרוכות בשימוש שורות תאים סרטניים מודלים העכבר כדי להבין טוב יותר את האירועים גנטי ייזום בפתוגנזה של מחלות 6, 7. לאחרונה, החצוצרה התפתחה כאתר הרומן מוצא SOC, עם החצוצרות (FT) התאים מפרישים אפיתל (FTSEC) כתא המוצע של 8 המוצא, 9. כרגע אין קווים סלולריים או מערכות תרבות זמין ללמוד את האפיתל FT או FTSEC. כאן אנו מתארים לשעבר רומן vivo התרבות מערכת שבה העיקרי בתאי האפיתל FT אדם מתורבתים באופן שמשמר ארכיטקטורה שלהם, קוטביות, immunophenotype, ובתגובה ללחצים פיזיולוגי genotoxic. מודל זה vivo לשעבר מספק כלי שימושי לחקר SOC, ומאפשר הבנה טובה יותר של כמה גידולים יכול לנבוע רקמה זו, המנגנונים המעורבים בייזום התקדמות הגידול.
Protocol
Discussion
הזיהוי של FT כאתר מועמד ממוצא עבור SOC מספק הזדמנות למחקר בסיסי translational שמטרתן לפענח את המנגנונים המקשרים גורמי סיכון ידועים ותהליך בפועל מסרטנים הצפק. קריטי עבור זה הוא פיתוח של מערכות מודל ממושמע שיאפשר לנו להתחיל לבדוק את ההשערה כי FTSEC הוא תא-of-מקור עבור קרצינומה הצפק האגן. Vivo לשעבר התרבות המודל שתואר להלן, היא מערכת חדשנית המאפשרת את הבידוד ושיתוף תרבות של הפרשה FT ראשוניים בתאים ריסי באופן שמשמר את המורפולוגיה והביולוגיה של האפיתל FT הילידים. באמצעות מערכת זו, אנו לאחרונה שאפיינה את secretome של האפיתל הזה ואיך האפיתל מגיב פגיעה מכנית genotoxic 10. הביוץ, גורם סיכון מרכזי הקשור tumorigenesis השחלות, מאופיין על ידי שילוב של פגיעה ברקמות, מתווכים דלקתיים, גורמי גדילה, והורמונים 11. מערכת זו יכולה לשמש כדי לחקור את ההשפעה של הסביבה הביוץ על התגובה ואת הכדאיות של הפרשה ותאי ריסי. בנוסף, ההשפעה של סוגי תאים אחרים (כלומר תאים דלקתיים) ניתן היה לבדוק על מנת לאפשר הבנה טובה יותר של אירועים מסוג זה בתא הכונן בידול הגורמים שתורמים השינוי neoplastic של תאים אלה. מודלים דומים תוארו ברקמות האפיתל מקוטב אחר שבו הוא ההווה. למשל, בתרבויות העיקרי מקוטב של אפיתל דרכי הנשימה, ההשפעה של heregulin על צמיחת התאים בתגובה לפציעה הסלולר הוערך 12. אלו סוגים של מערכות מודל לספק דרך חדשה ושימושית ללמוד את חניכה בפתוגנזה של גידולים אשר נובעים רקמות אפיתל, ואת זה הוא בעל חשיבות קריטית ברקמות כגון FT שבו אין שורות תאים קיימות כיום, והיכן יש גדול לצורך זיהוי של המסלולים מפתח ופיתוח של אסטרטגיות טיפול חדשניות.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנו מודים סגל, חברים, תושבים, עוזרי רופא של בריגהאם ובית החולים לנשים, המחלקה לפתולוגיה להכנת רקמה זמין עבור מחקרים אלו. עבודה זו נתמכה על ידי מענקי מחקר מ-NIH / המכון הלאומי לסרטן (P50 CA105009, K08 CA108748, U01 CA152990), סרטן השחלות קרן מחקר, קרן קיי, נוברטיס פרמצבטיקה, רוברט ודבורה ראשון הקרן, רנדי וג'ואל סרטן השחלות מאי קאטלר מחקר הקרן, מרשה ריבקין קרן – פרס המלומד מדעי, AACR – ג'ורג' פטרישיה Sehl אחוות סרטן וגנטיקה המחקר, ואת אחוות רופא האמריקנית לרפואת בישראל – קלייר ועמנואל ג'רוזנבלט קרן גרנט.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Collagen from human placenta (Bornstein and Traub Type IV) | Sigma | C7521 | ||
| DMEM:F12 media | Cellgro | 15-090-CV | ||
| Ultroser G | Crescent Chemical Company | 67042 | Add 20 ml of DMEM:F12 to stock bottle and use 10mls per 500 ml of media (2% final concentration) | |
| Pen Strep | Invitrogen | 15140-122 | ||
| BD Primaria culture plates | BD Bioscience | 353802 | ||
| 24 well Transwell Permeable supports | Corning (Costar) | 3470 | Clear, 6.5 mm insert, 0.4 μm pore size, treated polyester | |
| MEM (Minimal Essential Media) | Cellgro | 10-010-CV | ||
| Pronase | Roche | 11459643001 | ||
| DNAse | Sigma | DN25 | ||
| Sall2 antibody | Dr T. Benjamin, Harvard | Gift | 1:20 dilution | |
| Pax8 antibody | Proteintech | 10336-1-AP | 1: 1000 dilution |
References
- Jemal, A., Siegel, R., Xu, J., Ward, E. Cancer statistics. CA Cancer J. Clin. 60, 277-300 (2010).
- Markman, M., Walker, J. L. Intraperitoneal chemotherapy of ovarian cancer: a review, with a focus on practical aspects of treatment. J. Clin. Oncol. 24, 988-994 (2006).
- Liu, J., Matulonis, U. A. New advances in ovarian cancer. Oncology (Williston Park). 24, 721-728 (2010).
- Cannistra, S. A. Cancer of the ovary. N. Engl. J. Med. 351, 2519-2529 (2004).
- Kurman, R. J., Shih, I. M. The origin and pathogenesis of epithelial ovarian cancer: a proposed unifying theory. Am. J. Surg. Pathol. 34, 433-443 (2010).
- Fong, M. Y., Kakar, S. S. Ovarian cancer mouse models: a summary of current models and their limitations. J Ovarian Res. 2, 12-12 (2009).
- Shan, W., Liu, J. Epithelial ovarian cancer: focus on genetics and animal models. Cell Cycle. 8, 731-735 (2009).
- Levanon, K., Crum, C. P., Drapkin, R. New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact. J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).
- Karst, A. M., Drapkin, R. Ovarian cancer pathogenesis: a model in evolution. J Oncol. 2010, 932371-932371 (2010).
- Levanon, K., Ng, V., Piao, H. Y., Zhang, Y., Chang, M. C., Roh, M. H., Kindelberger, D. W., Hirsch, M. S., Crum, C. P., Marto, J. A., Drapkin, R. Primary ex vivo cultures of human fallopian tube epithelium as a model for serous ovarian carcinogenesis. Oncogene. 25, 1103-1113 (2010).
- Landen, C. N., Birrer, M. J., Sood, A. K. Early events in the pathogenesis of epithelial ovarian cancer. J. Clin. Oncol. 26, 995-1005 (2008).
- Vermeer, P. D., Einwalter, L. A., Moninger, T. O., Rokhlina, T., Kern, J. A., Zabner, J., Welsh, M. J. Segregation of receptor and ligand regulates activation of epithelial growth factor receptor. Nature. 422, 322-326 (2003).
