Floresan immuno-Kimya tespiti için kullanılması Edwardsiella ictaluri Kanal kedibalığı ( I. punctatus) Örnekleri
Summary
Burada etiketleme olanak sağlayan bir prosedür<em> In situ Edwardsiella ictaluri</em> Kanal kedibalığı histolojik kesitlerde<em> Ictalurus punctatus</em> Birincil ve ikincil olarak floresan FITC etiketli antikorlar monoklonal antikorlar ile dolaylı immünohistokimya Ed9. Bu tespiti için floresan mikroskopi kullanılarak bakterinin izin verdi.
Abstract
Kanal kedibalığı Ictalurus punctatus önemli bir patojen Edwardsiella ictaluri ve yaklaşık üç yıl 1,2 önce keşfetmiş oldu ederken, şimdiye kadar, bu yazarların bilgi en iyi, hiçbir yöntem in situ görselleştirme izin vermek için geliştirilmiş oldu histolojik kesitlerde bakteri.
Plaka sayıları 3, radyometrik etiketli 4, ya da bioluminescent bakteri 5 kullanarak önceki çalışmalar in vivo bakteriyel yerelleştirme belirlenecek olsa da, bu çalışmaların çoğu sadece bir istisna dışında 6 ile brüt organ seviyesinde olmuştur . Bu sınırlama özellikle endişe vericidir, çünkü E. ictaluri karmaşık bir enfeksiyon döngüsü 1,7 ve 8,9 virülans faktörleri bir çeşitlilik vardır. E. karmaşık bir etkileşim ictaluri, ev sahibi ile, aynı taksonomik aile içinde Salmonella typhi 10, birçok bakımdan benzer .
Burada Ainsworth ve ark tarafından tanımlanan monoklonal antikor Ed9 kullanarak dolaylı immün histokimya 11 kullanılarak bakterilerin tespiti için izin veren bir tekniktir .
Kısaca, engelleyici bir serum non-spesifik biding önlemek için parafin histolojik kesitlerde uygulanır. E.: Daha sonra, bölümleri birincil antikor ile inkübe edilir ictaluri spesifik monoklonal antikor Ed9. Aşırı antikorlar durulanır ve FITC etiketli sekonder antikor eklenir. Durulandıktan sonra, bir floresan özel montaj orta bölümleri ile monte edilir.
Bu tespiti E. için izin kanal kedibalığı dokuların histolojik kesitlerde in situ ictaluri.
Protocol
Discussion
Bu protokol, histolojik kesitlerde kedibalığı patojen Edwardsiella ictaluri yerinde görselleştirme için kullanılan bir tekniktir. Bizim bilgilerimize göre en iyi şekilde, bu açıklanan ilk böyle bir protokol.
En kritik adım, deneyimlerimiz, yanlış pozitif yol açabilir yetersiz yıkama gibi mevcut protokol adım 4.4 'de anlatıldığı gibi antikorların durulama.
, Bu tekniğin sonuçları yorumlama temel sorun doku otomatik floresan. …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar Michelle Banes teknik yardımın yanı sıra Dr. Petrie-Hanson, Dr. Eels ve Timothy Brown, onların yardım ve immünohistokimya performans tanımak istiyoruz. Bu proje, ABD Tarım Bakanlığı CRIS proje # MISV-0801310 ve Veteriner Mississippi State University College tarafından finanse edildi.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| Brain Infusion broth | Becton Dickinson | 237200 |
| MS222 | Argent Labs | |
| Whole mouse Serum | Cappel | 55989 |
| Goat anti-mouse FitC | Southern Biotech | 1010-04 |
| Permafluor | Lab Vision | Ta-030-FM |
| Potassium chloride (KCl) | Sigma | P-4504 |
| Triton-X | Sigma-Aldrich | X100-6X500ML |
| Bovine Serum Albumin | Sigma | 85040C |
| Potassium phosphate (KH2PO4) | Sigma | P-5379 |
| Sodium Bicarbonate (NaHCO3) | Sigma | S-5761 |
| Sodium chloride (NaCal) | Sigma | S-9625 |
| Sodium phosphate dibasic(Na2HPO4) | Sigma | S-9390 |
References
- Plumb, J. A., Woo, P. T. K., Bruno, D. W. . Fish Diseases and Disorders. , 479-479 (1998).
- Roberts, R. J. . Fish Pathology. , (2001).
- Lawrence, M. L. . Louisiana State University. , (1997).
- Nusbaum, K. E., Morrisson, E. E. Entry of 35S-Labeled Edwardsiella ictaluri into Channel Catfish. Journal of Aquatic Animal Health. 8, 146-146 (1996).
- Karsi, A., Menanteau-Ledouble, S., Lawrence, M. L. Development of bioluminescent Edwardsiella ictaluri for noninvasive disease monitoring. FEMS Microbiology Letters. 260, 286-286 (2006).
- Miyazaki, T., Plumb, J. A. Histopathology of Edwardsiella ictaluri in channel catfish, Ictalurus punctatus (Rafinesque). Journal of Fish Diseases. 8, 839-839 (1985).
- Areechon, N., Plumb, J. A. Pathogenesis of Edwardsiella ictaluri in Channel Catfish, Ictalurus punctatus. Journal of the World Mariculture Society. 14, 249-249 (1983).
- Dumpala, P. R., Lawrence, M. L., Karsi, A. Proteome analysis of Edwardsiella ictaluri. Proteomics. 9, 1353-1353 (2009).
- Thune, R. L. Signature-Tagged Mutagenesis of Edwardsiella ictaluri Identifies Virulence-Related Genes, Including a Salmonella Pathogenicity Island 2 Class of Type III Secretion Systems. Applied and Environmental Microbiology. 73, 7934-7934 (2007).
- Karsi, A. High-throughput bioluminescence mutant screening strategy for identification of bacterial virulence genes. Applied and Environmental Microbiology. 75, 2166-2166 (2009).
- Hook, E. W., Mandell, G. L., Douglas, G., Bennett, J. E. . Principles and Practices of Infectious Diseases. , 1700-1700 (1990).
- Ainsworth, J., Capley, G., Waterstreet, P., Munson, D. Use of monoclonal antibodies in the indirect fluorescent antibody technique (IFA) for the diagnosis of Edwardsiella ictaluri. Journal of Fish Diseases. 9, 439-439 (1986).
