の検出のための蛍光免疫化学の使用エドワードシエラ属ictaluriブチナマズで（ I. punctatus）のサンプル
Summary
ここではのラベル付けを可能にする手順を説明します。<emその場で>エドワードシエラ属ictaluri</em>ブチナマズから組織切片で<em> Ictalurus punctatus</em>セカンダリとして、プライマリ、および蛍光FITC標識抗体としてモノクローナル抗体を用いた間接免疫組織化学Ed9を使用。これは、蛍光顕微鏡を用いた細菌の検出に使用できます。
Abstract
エドワードシエラ属ictaluriがチャネルナマズIctalurus punctatusの主要な病原体であり、1,2年近く前に三十年を発見してきたが、これまでのところ、これらの筆者の知る限りでは、メソッドはその場可視化のために開発されていない組織切片中の細菌。
細菌の局在が4、または生物発光細菌5というラベルの放射プレートカウント3を 、使用して、以前の研究で、生体内で決定されていますが、これらの研究のほとんどは、唯一の例外は6で、総臓器レベルで行われている。この制限は、E.ので特に懸念されるictaluriは、複雑な感染サイクル1,7を有し、そしてそれは、病原性因子8,9の様々なています。 E.の複雑な相互作用そのホストとictaluriは、同じ分類の家族になっているチフス菌10日に多くの点で似ています。
ここでは、エインズワースらにより記載されたモノクローナルEd9抗体を用いた間接免疫組織化学。11を使用して細菌の検出を可能にするテクニックを説明します。
簡単に言えば、ブロッキング血清は、非特異的bidingを防ぐために、パラフィン包埋組織切片に適用されます。 E.：次に、切片を一次抗体とインキュベートされていますictaluri特異的モノクローナル抗体Ed9。過剰な抗体は、すすぎされ、FITC標識二次抗体が追加されます。洗浄後、切片を蛍光特定の封入剤でマウントされています。
E.の検出のために許容されるこのブチナマズ組織の組織切片のin situでictaluri。
Protocol
Discussion
このプロトコルの詳細組織切片のナマズ病原菌エドワードシエラ属ictaluriの in situ可視化のためのテクニック。我々の知る限り、これは説明する最初のそのようなプロトコルです。
最も重要なステップは、我々の経験では、偽陽性をもたらすことができるように不十分な洗浄として本プロトコールのステップ4.4に記載の抗体の洗浄です。
<p class="jove_content"…Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は彼らの援助が開発し、免疫組織化学を行うための技術的なミシェルのバネスの援助だけでなく、博士ペトリ-ハンソン、博士のウナギとティモシーブラウンに感謝申し上げます。このプロジェクトは、米国農務省CRISプロジェクト＃MISV – 0801310によって獣医学のミシシッピ州立大学によって資金を供給された。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| Brain Infusion broth | Becton Dickinson | 237200 |
| MS222 | Argent Labs | |
| Whole mouse Serum | Cappel | 55989 |
| Goat anti-mouse FitC | Southern Biotech | 1010-04 |
| Permafluor | Lab Vision | Ta-030-FM |
| Potassium chloride (KCl) | Sigma | P-4504 |
| Triton-X | Sigma-Aldrich | X100-6X500ML |
| Bovine Serum Albumin | Sigma | 85040C |
| Potassium phosphate (KH2PO4) | Sigma | P-5379 |
| Sodium Bicarbonate (NaHCO3) | Sigma | S-5761 |
| Sodium chloride (NaCal) | Sigma | S-9625 |
| Sodium phosphate dibasic(Na2HPO4) | Sigma | S-9390 |
References
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