نيون استخدام الكيمياء المناعية للكشف عن الإدواردسيلة ictaluri في سمك السلور قناة ( أولا punctatus) عينات
Summary
نحن هنا وصف الإجراء يسمح للتوسيم<em> الإدواردسيلة ictaluri في الموقع</em> في المقاطع النسيجية من قناة السلور<em> Ictalurus punctatus</em> باستخدام المناعية غير المباشرة مع الاجسام المضادة Ed9 باعتبارها الأضداد FitC الأولية ، وصفت بأنها الفلورسنت ثانوية. هذا يسمح للكشف عن هذه البكتيريا باستخدام المجهر الفلورسنت.
Abstract
بينما الإدواردسيلة ictaluri هو الممرض الرئيسي للقناة السلور Ictalurus punctatus ولقد تم اكتشاف ما يقرب من ثلاثة عقود مضت 1،2 ، حتى الآن ، أفضل من هذه المعرفة من الكتاب ، وقد وضعت توجد طريقة للسماح التصور في الموقع من البكتيريا الموجودة في المقاطع النسيجية.
في حين تم تحديد توطين الجرثومي في الجسم الحي في الدراسات السابقة باستخدام لوحة العد 3 ، 4 الراديومترية المسمى ، أو البكتيريا bioluminescent 5 ، إلا أن معظم هذه الدراسات أجريت على مستوى الجهاز الإجمالي ، مع استثناء واحد 6. هذا القيد هو مصدر قلق خاص لأن E. ictaluri لديه دورة العدوى 1،7 معقدة ، ولها مجموعة متنوعة من عوامل الفوعة 8،9. التفاعل المعقد بين هاء ictaluri مع مضيفه تشبه من نواح كثيرة لالسالمونيلا التيفية 10 ، وهو في نفس العائلة التصنيفية.
نحن هنا وصف تقنية تسمح للكشف عن بكتيريا غير المباشرة باستخدام الكيمياء النسيجية المناعية باستخدام أجسام مضادة وحيدة النسيلة Ed9 اينسورث التي وصفها آخرون 11.
باختصار ، يتم تطبيق حظر على المصل المقاطع النسيجية جزءا لا يتجزأ من البرافين لمنع غير محددة المتعهدة. ثم يتم تحضين المقاطع مع الضد الابتدائي : E. ictaluri ريتوكسيماب Ed9 محددة. يتم شطف الأضداد الزائدة بعيدا وتضاف FitC الأضداد الثانوي المسمى. بعد الشطف ، هي التي شنت المقاطع مع وسيلة معينة الفلورسنت المتزايدة.
هذا يسمح للكشف عن E. ictaluri في الموقع في الفروع النسيجي للأنسجة سمك السلور القناة.
Protocol
Discussion
هذا البروتوكول تفاصيل تقنية عن التصور في الموقع من ictaluri الممرض الإدواردسيلة سمك السلور في الفروع النسيجية. إلى حد علمنا ، وهذا هو أول بروتوكول من هذا القبيل وصفها.
الخطوة الأكثر أهمية ، في تجربتنا ، هو الشطف من الأض…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
الكتاب ترغب في التعرف على المساعدة التقنية من بانيس ميشيل وكذلك الدكتور هانسون ، بيتري ، الأنقليس الدكتور تيموثي براون ولما قدموه من مساعدة البلدان النامية وتنفيذ المناعية. وقد تم تمويل هذا المشروع من قبل وزارة الزراعة الأميركية كريس المشروع # MISV – 0801310 وكلية جامعة ولاية ميسيسيبي للطب البيطري.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| Brain Infusion broth | Becton Dickinson | 237200 |
| MS222 | Argent Labs | |
| Whole mouse Serum | Cappel | 55989 |
| Goat anti-mouse FitC | Southern Biotech | 1010-04 |
| Permafluor | Lab Vision | Ta-030-FM |
| Potassium chloride (KCl) | Sigma | P-4504 |
| Triton-X | Sigma-Aldrich | X100-6X500ML |
| Bovine Serum Albumin | Sigma | 85040C |
| Potassium phosphate (KH2PO4) | Sigma | P-5379 |
| Sodium Bicarbonate (NaHCO3) | Sigma | S-5761 |
| Sodium chloride (NaCal) | Sigma | S-9625 |
| Sodium phosphate dibasic(Na2HPO4) | Sigma | S-9390 |
References
- Plumb, J. A., Woo, P. T. K., Bruno, D. W. . Fish Diseases and Disorders. , 479-479 (1998).
- Roberts, R. J. . Fish Pathology. , (2001).
- Lawrence, M. L. . Louisiana State University. , (1997).
- Nusbaum, K. E., Morrisson, E. E. Entry of 35S-Labeled Edwardsiella ictaluri into Channel Catfish. Journal of Aquatic Animal Health. 8, 146-146 (1996).
- Karsi, A., Menanteau-Ledouble, S., Lawrence, M. L. Development of bioluminescent Edwardsiella ictaluri for noninvasive disease monitoring. FEMS Microbiology Letters. 260, 286-286 (2006).
- Miyazaki, T., Plumb, J. A. Histopathology of Edwardsiella ictaluri in channel catfish, Ictalurus punctatus (Rafinesque). Journal of Fish Diseases. 8, 839-839 (1985).
- Areechon, N., Plumb, J. A. Pathogenesis of Edwardsiella ictaluri in Channel Catfish, Ictalurus punctatus. Journal of the World Mariculture Society. 14, 249-249 (1983).
- Dumpala, P. R., Lawrence, M. L., Karsi, A. Proteome analysis of Edwardsiella ictaluri. Proteomics. 9, 1353-1353 (2009).
- Thune, R. L. Signature-Tagged Mutagenesis of Edwardsiella ictaluri Identifies Virulence-Related Genes, Including a Salmonella Pathogenicity Island 2 Class of Type III Secretion Systems. Applied and Environmental Microbiology. 73, 7934-7934 (2007).
- Karsi, A. High-throughput bioluminescence mutant screening strategy for identification of bacterial virulence genes. Applied and Environmental Microbiology. 75, 2166-2166 (2009).
- Hook, E. W., Mandell, G. L., Douglas, G., Bennett, J. E. . Principles and Practices of Infectious Diseases. , 1700-1700 (1990).
- Ainsworth, J., Capley, G., Waterstreet, P., Munson, D. Use of monoclonal antibodies in the indirect fluorescent antibody technique (IFA) for the diagnosis of Edwardsiella ictaluri. Journal of Fish Diseases. 9, 439-439 (1986).
