El uso de cerdos domésticos y en miniatura en la ciencia se ha incrementado significativamente en los últimos años. Mediante la demostración de cómo llevar a cabo la intubación, cateterización transuretral de la vejiga, la arteria femoral y cateterización de la vena, así como la perfusión transcardial, nuestro objetivo es aumentar aún más el valor de cerdos enanos Göttingen en la investigación biomédica.
La aparición de la minipig Göttingen en la investigación de temas como la neurociencia, la toxicología, la diabetes, la obesidad y la cirugía experimental refleja la estrecha semejanza de estos animales a la anatomía y fisiología humana 1.6. El tamaño de la minipig Göttingen permite el uso de cirugía equipos y avanzadas técnicas de imagen similares a las utilizadas en humanos 6-8. El objetivo de este video instructivo es aumentar la conciencia sobre el valor de los enanos en la investigación biomédica, mediante la demostración de cómo realizar la intubación traqueal, la cateterización transuretral de la vejiga, la arteria femoral y cateterización de la vena, así como la perfusión transcardial.
La intubación endotraqueal se debe realizar cada vez que un minipig se somete a anestesia general, ya que mantiene una vía aérea permeable, permite la ventilación asistida y protege las vías respiratorias de los aspirados. Cateterismo transuretral de la vejiga puede proporcionar información útil sobre el estado de hidratación, así como sobre la función renal y cardiovascular durante procedimientos quirúrgicos largos. Además, el cateterismo urinario puede evitar la contaminación de los delicados equipos medico-técnico y la extensión de vejiga dolorosa que le puede hacer daño al animal e innecesariamente influir en el experimento debido a un aumento del tono vagal y la alteración de parámetros fisiológicos. Cateterización venosa y arterial es útil para la obtención de muestras repetidas de sangre y monitoreo de parámetros fisiológicos distintos. La cateterización de los vasos femorales es preferible a la cateterización de los vasos del cuello para facilitar el acceso, cuando se realizan experimentos con marco basado en neurocirugía estereotáxica y de imagen cerebral. Cuando se realiza un cateterismo buque en estudios de supervivencia, la técnica aséptica debe ser empleado para evitar infecciones 6. Perfusión Transcardial es el método de fijación más efectiva, y con resultados por excelencia en la preparación de los órganos minipig para histología e histoquímica 2,9. Para obtener más información acerca de la anestesia, la cirugía y las técnicas experimentales en cerdos, en general, nos referimos a la estafa de 2007. Información complementaria acerca de la premedicación y la inducción de la anestesia, ventilación asistida, analgesia, cuidado pre y postoperatorio de los cerdos enanos Göttingen están disponibles a través de Internet en http://www.minipigs.com 10. Para una amplia información sobre la anatomía porcina nos referimos al níquel et al. Vol. Noviembre 01 al 05.
Esta presentación proporciona instrucciones paso a paso las instrucciones visuales en la forma de realizar cuatro procedimientos utilizados en la investigación minipig 12,13. Las técnicas descritas pueden ser utilizadas con poca o ninguna adaptación en los cerdos Landrace y otros animales de investigación de gran tamaño como los perros y las ovejas 14. La técnica aséptica se deben emplear para evitar las infecciones, al realizar los procedimientos descritos en estudios de supervivencia.
Inducción de la anestesia es importante para el bienestar de los animales y las razones científicas, y debe proporcionar la ausencia de reflejos corneales y buena relajación muscular, antes de la intubación endotraqueal se intenta. Sin embargo, debido a los anestésicos utilizados para la inducción no se administran en dosis fijas, pero administradas hasta el efecto deseado se observa, es importante vigilar de cerca al animal, debido al riesgo de apnea del sueño, especialmente si se utiliza propofol 6,10. Para la intubación traqueal, el uso de spray de xilocaína o relajante muscular puede facilitar la introducción de la sonda, pero el uso de bloqueadores neuromusculares sólo debe ser realizado por personal bien entrenado en estos procedimientos de manera que cumpla con los requisitos éticos. Se debe tener cuidado de no traumatizar el paso laríngeo durante la intubación, para evitar la inflamación y el edema traqueal. Edema de vías aéreas pueden ser tratados con AINE o similares anti-inflamatorios no esteroideos 10. Los cerdos pueden ser intubados desde varias posiciones, pero que el animal en la espalda tiende a ser más fácil para aquellos que llevan a cabo regularmente la intubación humanos, ya que presenta la vía respiratoria de una manera similar 6. El error más común durante la intubación es la colocación accidental de la sonda en el esófago, que está situado justo debajo del paso de laringe cuando el animal se coloca en la espalda. Tenga en cuenta que el tubo no se debe avanzar sin identificación clara de los cartílagos aritenoides y las cuerdas vocales.
Cateterismo transuretral de la vejiga urinaria a través de la uretra se hace fácilmente en las cerdas, mientras que este procedimiento es extremadamente difícil, quizás imposible, en los hombres 6. Cabe señalar que desde el orificio de la uretra femenina es anterior a la vagina, la abertura más grande vaginal puede ser erróneamente sondaje. El uso de lubricante estéril y desinfección se recomienda para estudios de supervivencia. Además, el lubricante con efecto anestésico local puede facilitar el procedimiento de cateterización.
Al realizar la arteria femoral y cateterización venosa, la elección de los catéteres buque y la forma en que se fijan diferencias entre la supervivencia y no estudios de supervivencia, sobre todo cuando los catéteres son implantados por un período prolongado de tiempo 6. Por ejemplo, para la implantación de catéteres crónicos debe ser altamente biocompatibles, tienen cuentas de retención o para la fijación de los puños, así como no traumatizar a la pared del vaso con el tiempo, lo que induce trombosis o erosión 6.
En el video de la actualidad, se utiliza un sistema cerrado alimentado por aire comprimido para la perfusión transcardial. Otra opción es utilizar un sistema impulsado por la gravedad. La ventaja de los sistemas de gravedad, en comparación con los sistemas que utilizan el aire comprimido es que son simples, eficientes y no presentan riesgos de aire a presión entra en el sistema vascular. Sin embargo, la presión hidrostática ejercida por los sistemas de gravedad cambia continuamente durante la perfusión, y esto puede afectar los resultados histológicos 15. Dependiendo de qué tipo de estudios histopatológicos que se quiere realizar, puede ser ventajoso para la perfusión del animal con suero salino heparinizado primero. Esto es especialmente importantance al realizar la tinción de inmunofluorescencia con el fin de evitar los problemas causados por la autofluorescencia eritrocitos. Además, si el órgano de interés es el cerebro, la aorta descendente puede ser fijada para salvar fijador. Sin embargo, en los cerdos, este paso implica la disección de más y prolongará el procedimiento.
The authors have nothing to disclose.
El estudio fue apoyado financieramente por la Fundación Lundbeck, La Fundación Karen Elise Jensen, el Fondo de Investigación Sanitaria de la Región Central de Dinamarca y el Instituto de Medicina Clínica del Hospital Universitario Aarhus. Reconocemos con gratitud la ayuda hábil de Donald F. Smith, Anders Steen Soerensen, Henrik Soerensen, Asbjoern Ettrup-Christensen, y el personal de Paaskehoejgaard.
Procedure | Equipment | Company | Catalogue-number |
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Intubation | |||
Respirator | Datex-Ohmeda S/S Avance, GE Healthcare | 1009-9002-000 | |
Suction with blunt tip | Unomedical | 34091181 | |
Laryngoscope | Miller | 85-0045 (Laryngoscope set) | |
Endotracheal tube 5.5 mm ID | Smiths Medical International Ltd. | 100/199/055 | |
Stylet | Hudson RCI | 5-151001 | |
Syringe 5ml | |||
Stethoscope | Martin | 17-262-00 | |
Bladder catherization | |||
AquaFlate glycerine silicone Foley catheter 8-French with stylet | Rüsch | 178003 | |
Speculum nasal | Martin | 36-859-50 | |
Speculum rectal | Martin | 30-613-15 | |
Blunt-tip forceps | Martin | 13-374-16 | |
Catheter lubricant gel | |||
Cathejell Lidocain | Montavit | CJL08501 | |
Instillagel Comb. | Farco Pharma | 08-40-200 | |
A4 Urine drainage bag | Unomedical | 38 155 1S | |
Adhesive tape | |||
Femoral artery and vein catherization </ | |||
Scalpel | Martin | 10-295-11 | |
Blunt-tip surgical scissors | Martin | 11-881-18 | |
Tissue forceps | Martin | 12-100-14 | |
Small blunt-tip surgical forceps | Martin | 13-375-13 | |
Small self-retaining Tissue retractor | Martin | 15-753-13 | |
Needleholder | Martin | 20-634-14 | |
Surgical swaps | |||
Suture with needle | |||
Saline | |||
Heparine | LEO | 585679 | |
18-gauge venflon | BD Venflon Pro | 393206 | |
4-French brite tip sheaths with introducer and Seldinger guide wire | Cordis | 154-2629-1/0017 | |
Transcardial perfusion | |||
Pressurized perfusion system | Home made from parts available in most professional hardware stores | ||
Fume extraction system | Gram A/S | 01750000 and 0303700 | |
Perfusant 5L | |||
Blunt-tip surgical scissors | Martin | 11-881-18 | |
Bone shears | F.S.T | 16150-24 | |
Large curved tip self-holding forceps | Martin | 13-421-18 | |
Self retaining sternal retractor | Rudolf Medical | 7520-10 | |
Pentobarbital | The Royal Veterinary and Agricultural University (KVL) | 200 mg/ml | |
22-gauge venflon | BD Venflon Pro | 393202 |