O uso de suínos domésticos e em miniatura na ciência tem aumentado significativamente nos últimos anos. Ao demonstrar como executar a intubação, cateterismo vesical transuretral, artéria femoral e cateterização da veia, bem como a perfusão transcardial, pretendemos aumentar ainda mais o valor de Göttingen minipigs na pesquisa biomédica.
O surgimento do minipig Göttingen na pesquisa de temas como a neurociência, toxicologia, diabetes, obesidade e cirurgia experimental reflete a estreita semelhança destes animais à anatomia e fisiologia humana 1-6. O tamanho da minipig Göttingen permite o uso de cirurgia equipamentos e avançados métodos de imagem semelhantes aos usados em humanos 6-8. O objetivo deste vídeo-aula é aumentar a consciência sobre o valor dos porquinhos na pesquisa biomédica, demonstrando como executar a intubação traqueal, cateterismo vesical transuretral, artéria femoral e cateterização da veia, bem como a perfusão transcardial.
Intubação endotraqueal deve ser realizada sempre que um minipig sofre anestesia geral, porque mantém uma via aérea patente, permite ventilação assistida e protege as vias aéreas dos aspirados. Cateterismo vesical transuretral pode fornecer informações úteis sobre sobre o estado de hidratação, bem como função renal e cardiovascular durante longos procedimentos cirúrgicos. Além disso, cateterismo urinário podem evitar a contaminação de equipamentos médico-técnica delicada e extensão da bexiga dolorosa que pode prejudicar o animal e desnecessariamente influência do experimento devido ao aumento do tônus vagal e alteração nos parâmetros fisiológicos. Cateterização arterial e venosa é útil para a obtenção de amostras de sangue repetidas e monitoramento de vários parâmetros fisiológicos. Cateterização de vasos femorais é preferível a cateterização dos vasos do pescoço para maior facilidade de acesso, quando a realização de experimentos envolvendo frame-based neurocirurgia estereotáxica e imagiologia cerebral. Ao realizar o cateterismo navio em estudos de sobrevida, técnica asséptica rigorosa deve ser empregada para evitar infecções 6. Perfusão Transcardial é o método de fixação mais eficaz, e produz resultados de destaque na elaboração de órgãos minipig para histologia e histoquímica 2,9. Para mais informações sobre a cirurgia anestesia e técnicas experimentais em suínos, em geral nos referimos a Swindle 2007. Informações suplementares sobre a pré-medicação e indução da anestesia, ventilação assistida, analgesia, cuidados pré e pós-operatório de Göttingen porquinhos estão disponíveis através da Internet em http://www.minipigs.com 10. Para informações completas sobre anatomia suína nos referimos a Nickel et al. Vol. 01-05 novembro.
Esta apresentação fornece instruções passo-a-passo as instruções visuais sobre como realizar quatro procedimentos freqüentemente utilizados na pesquisa minipig 12,13. As técnicas descritas podem ser utilizados com pouca ou nenhuma adaptação em suínos da raça Landrace e outros animais de pesquisa de grande porte como cães e ovelhas 14. A técnica asséptica deve ser empregada para evitar infecções, ao executar os procedimentos descritos em estudos de sobrevida.
Indução da anestesia é importante para o bem-estar animal e as razões científicas, e deve fornecer ausência de reflexos da córnea e relaxamento muscular bom, antes da intubação traqueal é tentada. No entanto, porque os anestésicos usados para a indução não são dadas em doses fixas, mas administrado até o efeito desejado é observado, é importante acompanhar de perto o animal, devido ao risco de apnéia, especialmente se estiver usando propofol 6,10. Para a intubação traqueal, o uso de xilocaína spray ou relaxante muscular pode facilitar a introdução do tubo, mas o uso de bloqueadores neuromusculares deve ser feito apenas por pessoal que são bem treinados em tais procedimentos, de modo a estar em conformidade com os requisitos éticos. Cuidados devem ser tomados para não traumatizar a passagem da laringe durante a intubação, a fim de evitar o inchaço da traquéia e edema. Edema das vias aéreas pode ser tratada com AINE ou similar anti-inflamatórios 10. Os porcos podem ser entubados de várias posições, mas com o animal em sua parte traseira tende a ser mais fácil para aqueles que regularmente realizar intubação humano, pois apresenta as vias aéreas de forma semelhante 6. O erro mais comum durante a intubação é a colocação inadvertida do tubo no esôfago, que está situado logo abaixo da laringe a passagem quando o animal é colocado em suas costas. Note, o tubo não deve nunca ser avançados sem primeiro identificar claramente as cartilagens aritenóides e pregas vocais.
Cateterização transuretral da bexiga através da uretra é facilmente feito em suínos fêmeas, enquanto que este procedimento é extremamente difícil, talvez impossível, no sexo masculino 6. Deve-se notar que, desde o orifício da uretra feminina é anterior à vagina, a maior abertura vaginal pode ser erroneamente cateterizada. O uso de lubrificante estéril e desinfecção é aconselhável para estudos de sobrevida. Além disso, lubrificante com efeito anestésico local pode facilitar o procedimento de cateterismo.
Ao realizar artéria femoral e veia catherization, a escolha de cateteres navio e como eles são garantidos diferem entre a sobrevivência não e estudos de sobrevivência, especialmente quando os cateteres são implantados por um período prolongado de tempo 6. Por exemplo, cateteres para implantação crônica deve ser altamente biocompatível, tem contas a retenção ou punhos para fixação, bem como não traumatizar a parede do vaso ao longo do tempo, induzindo a trombose ou erosão 6.
No vídeo presente, nós usamos um sistema fechado alimentado por ar comprimido para perfusão transcardial. Outra opção é usar um sistema orientado pela gravidade. A vantagem dos sistemas de gravidade em comparação com sistemas que utilizam ar comprimido é que eles são simples, eficientes e não apresentam risco de ar pressurizado entrar no sistema vascular. No entanto, a pressão hidrostática exercida pela gravidade sistemas muda continuamente durante a perfusão, e isso pode afetar os resultados histológicos 15. Dependendo de qual tipo de estudos histopatológicos se quer executar, pode ser vantajoso para perfundir o animal com solução salina heparinizada primeiro. Este é importantance especial ao realizar a coloração de imunofluorescência, a fim de evitar problemas causados por autofluorescência eritrócitos. Além disso, se o órgão de interesse é o cérebro, a aorta descendente poderia ser fixada para salvar fixador. No entanto, em suínos, este passo implica adicionais dissecação e irá prolongar o procedimento.
The authors have nothing to disclose.
O estudo foi apoiado financeiramente pela Fundação Lundbeck, The Karen Elise Jensen Foundation, O Fundo de Pesquisa em Saúde da Região Central da Dinamarca e do Instituto de Medicina Clínica Aarhus University Hospital. Reconhecemos com gratidão a ajuda hábil de Donald F Smith, Steen Anders Soerensen, Soerensen Henrik, Asbjoern Ettrup-Christensen, e os funcionários da Paaskehoejgaard.
Procedure | Equipment | Company | Catalogue-number |
---|---|---|---|
Intubation | |||
Respirator | Datex-Ohmeda S/S Avance, GE Healthcare | 1009-9002-000 | |
Suction with blunt tip | Unomedical | 34091181 | |
Laryngoscope | Miller | 85-0045 (Laryngoscope set) | |
Endotracheal tube 5.5 mm ID | Smiths Medical International Ltd. | 100/199/055 | |
Stylet | Hudson RCI | 5-151001 | |
Syringe 5ml | |||
Stethoscope | Martin | 17-262-00 | |
Bladder catherization | |||
AquaFlate glycerine silicone Foley catheter 8-French with stylet | Rüsch | 178003 | |
Speculum nasal | Martin | 36-859-50 | |
Speculum rectal | Martin | 30-613-15 | |
Blunt-tip forceps | Martin | 13-374-16 | |
Catheter lubricant gel | |||
Cathejell Lidocain | Montavit | CJL08501 | |
Instillagel Comb. | Farco Pharma | 08-40-200 | |
A4 Urine drainage bag | Unomedical | 38 155 1S | |
Adhesive tape | |||
Femoral artery and vein catherization </ | |||
Scalpel | Martin | 10-295-11 | |
Blunt-tip surgical scissors | Martin | 11-881-18 | |
Tissue forceps | Martin | 12-100-14 | |
Small blunt-tip surgical forceps | Martin | 13-375-13 | |
Small self-retaining Tissue retractor | Martin | 15-753-13 | |
Needleholder | Martin | 20-634-14 | |
Surgical swaps | |||
Suture with needle | |||
Saline | |||
Heparine | LEO | 585679 | |
18-gauge venflon | BD Venflon Pro | 393206 | |
4-French brite tip sheaths with introducer and Seldinger guide wire | Cordis | 154-2629-1/0017 | |
Transcardial perfusion | |||
Pressurized perfusion system | Home made from parts available in most professional hardware stores | ||
Fume extraction system | Gram A/S | 01750000 and 0303700 | |
Perfusant 5L | |||
Blunt-tip surgical scissors | Martin | 11-881-18 | |
Bone shears | F.S.T | 16150-24 | |
Large curved tip self-holding forceps | Martin | 13-421-18 | |
Self retaining sternal retractor | Rudolf Medical | 7520-10 | |
Pentobarbital | The Royal Veterinary and Agricultural University (KVL) | 200 mg/ml | |
22-gauge venflon | BD Venflon Pro | 393202 |