שני הפוטונים הדמיה חשף תנועתיות הלימפוציטים אינטראקציות הסלולר בתוך הצומת לימפה בתנאי הבסיס, במהלך תגובה חיסונית 1. הנה, אנחנו מדגימים העברת המאמצת של תאים T, בידוד של בלוטות הלימפה, ועל תנועתיות הדמיה של CD4 + T תאים בתוך הצומת לימפה explanted.
שני הפוטונים הדמיה חשף כוריאוגרפיה אלגנטי של תנועתיות אינטראקציות הסלולר בתוך הצומת לימפה בתנאים הבסיסיים ועל ייזום של תגובה חיסונית 1. כאן, אנו מציגים שיטות להעברת המאמצת של תאים T שכותרתו, בידוד של בלוטות הלימפה, ועל תנועתיות הדמיה של CD4 + T תאים בתוך הצומת לימפה explanted כפי שתוארה לראשונה בשנת 2002 2. הדמיה דו פוטון של תאים חיסוניים דורש כי תאים שכותרתו fluorescently, או על ידי צביעה עם צבע גשש התא או על ידי הבעת חלבון פלואורסצנטי. אנו מדגימים את הליך העברת המאמצת של תאים שמקורם הזרקת עכברים התורם לווריד הזנב של חיה הנמען, שם הם בבית הלימפה לאיברים בתוך כ 15-30 דקות. אנו מדגימים את הבידוד של לימפה ולתאר שיטות כדי להבטיח הרכבה נכונה של הצומת לימפה נכרת. שיקולים נוספים כגון חמצון תקין של התקשורת perfused, טמפרטורה, כוח לייזר הם דנו. לבסוף, אנו מציגים תמונות וידאו 3D של CD4 + T תאים נאיבי מפגין תנועתיות מצב יציב על 37 ° C.
בפרוטוקול וידאו זה אנו מציגים את ההליכים להעברת תא המאמצים הלימפה בידוד והכנת הנדרש תנועתיות הלימפוציטים הדמיה לימפה היקפי. שני הפוטונים הדמיה יש מספר יתרונות על פני הדמיה confocal בשתי רקמות explanted (ראה כאן) בהכנות intravital. יש לציין, השימוש עירור אינפרא אדום ממזער פיזור אור ומאפשר הדמיה ~ 300 מיקרומטר מתחת הקפסולה של הצומת לימפה עמוק בתוך כמה רקמות 4. יתר על כן, רב פוטון עירור מוגבל לנקודת המוקד של המטרה, תוך מזעור צילום הלבנת נזק לרקמות את הצד של המטוס מוקד. כמו עם כל הטכניקה החדשה, לעומת זאת, שני הפוטונים הדמיה אינה תרופת פלא ואת המגבלות שלה ואת החסרונות פוטנציאל יש לזכור 5. בין אלה הוא הדרישה כי – למעט אותות מהותי כגון הדור השני הרמוני על ידי קולגן תאים עניין חייב להיות שכותרתו fluorescently על ידי בדיקות חיצוני או על ידי ביטוי של חלבונים ניאון. הרושם שנוצר ובכך כי תאים אלה שכותרתו שוחים בחלל השחור, ואילו לאמיתו של דבר הם שקועים, וליצור אינטראקציה עם הסביבה מורכבת של אלמנטים מבניים עצום אחרים ללא תווית, תאים בלתי נראה.
בשש השנים מאז כניסתה של הדמיה שני פוטונים על באימונולוגיה, טכניקה זו אפשרה לחוקרים כתובת ארוכת שאלות ישירות על ידי הדמיה של רקמות שלמות תהליכי החיים, כולל תאים תאים אינטראקציות, תנועתיות התא ולוקליזציה, מסלולי איתות הסלולר תאים ציטוטוקסיים הרג האירועים. התחום התפתח במהירות מעבר לתיאורים הפנומנולוגית הראשונית, ניתוחים כמותיים יחד עם דוגמנות המחשב וסימולציה עכשיו מתחילים להבין איך תנועות הסלולר כאוטית לכאורה ואת האינטראקציות בתוך בלוטות הלימפה להוביל תגובה חיסונית יעילה. התקדמות זו היא בדיקה מקיפה בפרסום האחרונות 1, אשר מונה מעל 100 מאמרים המתארים את היישום של מיקרוסקופיה שני פוטונים עבור immunoimaging.
אנו מבקשים להודות פקט רבקה לסיוע בהכנת מגיב. MPM נתמך על ידי מלגה ל Kirchstein רות predoctoral מן המכונים הלאומיים לבריאות ותמיכה מענקים GM-41514 (MDC), NS-48252 (KGC), GM-48071 (IP) גם מן המכונים הלאומיים לבריאות.