Методы для быстрой передачи и локализации патогенов Болезнь Лайма В Tick Gut
Summary
Лайма исследования медицинских исследований часто требуют поколения клещей инфицированы возбудителем Borrelia burgdorferi, процесс, который обычно занимает несколько недель. Здесь мы показываем, микроинъекции основе тик инфекции процедура, которая может быть выполнена в течение нескольких часов. Мы также продемонстрировать метод иммунофлюоресценции на месте локализации B. burgdorferi в клещи.
Abstract
Болезнь Лайма вызывается инфекцией с спирохеты Borrelia burgdorferi возбудителя, который ведется в природе клещей грызунов инфекционного цикла 1. Клещевого мышиной модели 2 был разработан для изучения болезни Лайма в лаборатории. Хотя наивная клещи могут быть заражены B. burgdorferi путем подачи их на зараженных мышей, линьки процесс занимает от нескольких недель до месяцев. Таким образом, разработка более быстрой и эффективной тик инфекции методы, такие, как микроинъекции основе процедуры, является важным инструментом для изучения болезни Лайма 3,4. Процедура требует лишь несколько часов для получения инфицированных клещей и позволяет контролировать доставку равные количества спирохет в когорту клещей. Это особенно важно, как и поколение B. burgdorferi инфицированных клещей на естественный процесс кормления на мышах не обеспечивает 100%-ная ставка инфекции и, возможно, приводит к изменению нагрузки возбудителя среди клещей кормили. Кроме того, микроинъекции может быть использована для заражения клещей с Б. burgdorferi изолятов в тех случаях, когда штамм ослабленных не может установить инфекции у мышей и, следовательно, не может быть естественным, приобретенных клещей 5. Этот метод может также использоваться для доставки множества других биологических материалов в клещи, например, специфические антитела или двухцепочечной РНК 6. В этой статье мы покажем, микроинъекции нимф клещей с в пробирке выращенных B. burgdorferi. Мы также будем описывать метод локализации болезни Лайма патогенных микроорганизмов в кишечнике клеща с помощью конфокальной микроскопии иммунофлуоресценции.
Protocol
Discussion
Здесь мы показываем, микроинъекции основе процедуры для быстрого и эффективного заражения нимф иксодовых клещей с бактериальным возбудителем B. burgdorferi. Мы также описываем конфокальной иммунофлюоресценции процедура выявления B. burgdorferi в тик кишки на месте. Хотя наша демон…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы искренне благодарим членов лаборатории Пал за помощь в подготовке этой демонстрации. Это исследование было поддержано грантами PHS AI076684 и AI080615 из NIH / NIAID.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glass capillary tubes | World Precision Instruments | TW100F-4 | ||
| Vertical glass puller | Narishige | PC-10 | ||
| Petroff-Hausser counting chamber | Hausser scientific | 3900 | ||
| Microloader pipette tips | Eppendorf | 930001007 | ||
| Femtojet microinjector | Eppendorf | 920010504 | ||
| Foot control FemtJet | Eppendorf | 920005098 | ||
| Phosphate buffered saline | Fisher Scientific | BP665-1 | Filter-sterilized |
References
- Steere, A. C., Coburn, J., Glickstein, L. The emergence of Lyme disease. J Clin Invest. 113, 1093-1101 (2004).
- Barthold, S. W., Diego, C., Philipp, M. T., Samuels, D. S., Radolf, J. D. . Borrelia, Molecular Biology, Host Interaction and Pathogenesis. , 353-405 (2010).
- Pal, U. OspC facilitates Borrelia burgdorferi invasion of Ixodes scapularis salivary glands. J Clin Invest. 113, 220-230 (2004).
- Yang, X. F., Pal, U., Alani, S. M., Fikrig, E., Norgard, M. V. Essential role for OspA/B in the life cycle of the Lyme disease spirochete. J Exp Med. 199, 641-648 (2004).
- Zhang, X., Yang, X., Kumar, M., Pal, U. BB0323 function is essential for Borrelia burgdorferi virulence and persistence through tick-rodent transmission cycle. J Infect Dis. 200, 1318-1330 (2009).
- Pal, U. TROSPA, an Ixodes scapularis receptor for Borrelia burgdorferi. Cell. 119, 457-468 (2004).
- Barbour, A. G. Isolation and cultivation of Lyme disease spirochetes. Yale J Biol Med. 57, 521-525 (1984).
- Narasimhan, S. Disruption of Ixodes scapularis anticoagulation by using RNA interference. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 1141-1146 (2004).
- Narasimhan, S. A tick antioxidant facilitates the Lyme disease agent’s successful migration from the mammalian host to the arthropod vector. Cell Host Microbe. 2, 7-18 (2007).
- Broadwater, A. H., Sonenshine, D. E., Hynes, W. L., Ceraul, S., DeSilva, A. Glass capillary tube feeding: a method for infecting nymphal Ixodes scapularis (Acari: Ixodidae) with the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi. J Med Entomol. 39, 285-292 (2002).
- Policastro, P. F., Schwan, T. G. Experimental infection of Ixodes scapularis larvae (Acari: Ixodidae) by immersion in low passage cultures of Borrelia burgdorferi. J Med Entomol. 40, 364-370 (2003).
- Fuente, d. e. l. a., Kocan, J., M, K., Almazan, C., Blouin, E. F. RNA interference for the study and genetic manipulation of ticks. Trends Parasitol. 23, 427-433 (2007).
