ティック腸内ライム病の病原体の迅速な伝達とローカリゼーションのための方法
Summary
ライム病の調査研究は、多くの場合、病原体ボレリアブルグドルフェリ、通常は数週間かかるプロセスに感染したダニの発生を必要とする。ここでは、時間内で達成可能なマイクロインジェクションベースのダニの感染症の手順を示しています。我々はまた、ダニの中でB.ブルグドルフェリのin situ局在のための免疫蛍光法を示しています。
Abstract
ライム病はダニ媒介げっ歯類の感染サイクル1で自然に維持されるスピロヘータの病原体ボレリアブルグドルフェリ 、感染によって引き起こされる。ダニ媒介性マウスモデル2は、実験室でライム病を研究するために開発されました。素朴なダニはB.に感染することができますが、 ブルグドルフェリは、感染マウスにそれらを供給することにより、脱皮のプロセスが完了するまでに数ヶ月に数週間かかる。したがって、このようなマイクロインジェクションベースの手続きとして、より迅速かつ効率的なダニの感染のテクニック、、の開発は、ライム病3,4の研究のための重要なツールです。手順は時間が感染したダニを生成するために必要とし、ダニのコホートにおけるスピロヘータの等量の配信を制御できます。これは、B.の世代としては特に重要です。マウスを使って自然な給餌法によるブルグドルフェリ感染したダニは葉ダニの間で病原体の負担の変動で100％の感染率と潜在的に結果を確実に失敗します。さらに、マイクロインジェクションは、B.とダニに感染するために使用することができます。 ブルグドルフェリは、弱毒株は、マウスでは感染を確立できないため、自然にダニ5によって取得できない場合には隔離。この手法はまた、例えば、特異的な抗体または二重のRNA 6座礁、ダニに他の生物学的、さまざまな素材を提供するために使用することができます。この記事では、Bをin vitroで成長にと若ダニのマイクロインジェクションのデモンストレーションを行いますブルグドルフェリ 。我々はまた、共焦点免疫蛍光顕微鏡を用いてダニの腸内のライム病の病原体の局在化のための方法を説明します。
Protocol
Discussion
ここでは、細菌性病原体Bと若虫マダニ属のダニの迅速かつ効率的な感染症のためにマイクロインジェクションベースの手順を示すブルグドルフェリ 。我々はまた、Bの検出のための共焦点蛍光抗体法の手順を説明します。 その場でダニの腸内ブルグドルフェリ 。私たちのデモでは、幼虫の腸を含むものの、同様の手順ではまた、幼虫、大人8,9のよう…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
私たちは心からこのデモの準備の支援のためにパルの研究室のメンバーに感謝。この研究は、NIH / NIAIDからPHS助成AI076684とAI080615によってサポートされていました。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glass capillary tubes | World Precision Instruments | TW100F-4 | ||
| Vertical glass puller | Narishige | PC-10 | ||
| Petroff-Hausser counting chamber | Hausser scientific | 3900 | ||
| Microloader pipette tips | Eppendorf | 930001007 | ||
| Femtojet microinjector | Eppendorf | 920010504 | ||
| Foot control FemtJet | Eppendorf | 920005098 | ||
| Phosphate buffered saline | Fisher Scientific | BP665-1 | Filter-sterilized |
References
- Steere, A. C., Coburn, J., Glickstein, L. The emergence of Lyme disease. J Clin Invest. 113, 1093-1101 (2004).
- Barthold, S. W., Diego, C., Philipp, M. T., Samuels, D. S., Radolf, J. D. . Borrelia, Molecular Biology, Host Interaction and Pathogenesis. , 353-405 (2010).
- Pal, U. OspC facilitates Borrelia burgdorferi invasion of Ixodes scapularis salivary glands. J Clin Invest. 113, 220-230 (2004).
- Yang, X. F., Pal, U., Alani, S. M., Fikrig, E., Norgard, M. V. Essential role for OspA/B in the life cycle of the Lyme disease spirochete. J Exp Med. 199, 641-648 (2004).
- Zhang, X., Yang, X., Kumar, M., Pal, U. BB0323 function is essential for Borrelia burgdorferi virulence and persistence through tick-rodent transmission cycle. J Infect Dis. 200, 1318-1330 (2009).
- Pal, U. TROSPA, an Ixodes scapularis receptor for Borrelia burgdorferi. Cell. 119, 457-468 (2004).
- Barbour, A. G. Isolation and cultivation of Lyme disease spirochetes. Yale J Biol Med. 57, 521-525 (1984).
- Narasimhan, S. Disruption of Ixodes scapularis anticoagulation by using RNA interference. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 1141-1146 (2004).
- Narasimhan, S. A tick antioxidant facilitates the Lyme disease agent’s successful migration from the mammalian host to the arthropod vector. Cell Host Microbe. 2, 7-18 (2007).
- Broadwater, A. H., Sonenshine, D. E., Hynes, W. L., Ceraul, S., DeSilva, A. Glass capillary tube feeding: a method for infecting nymphal Ixodes scapularis (Acari: Ixodidae) with the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi. J Med Entomol. 39, 285-292 (2002).
- Policastro, P. F., Schwan, T. G. Experimental infection of Ixodes scapularis larvae (Acari: Ixodidae) by immersion in low passage cultures of Borrelia burgdorferi. J Med Entomol. 40, 364-370 (2003).
- Fuente, d. e. l. a., Kocan, J., M, K., Almazan, C., Blouin, E. F. RNA interference for the study and genetic manipulation of ticks. Trends Parasitol. 23, 427-433 (2007).
