الطرق السريعة لنقل وتوطين مسببات المرض داخل القناة الهضمية لايم القراد
Summary
دراسات بحثية لايم المرض غالبا ما تتطلب جيل من القراد المصابين burgdorferi البورلية الممرض ، وهي العملية التي عادة ما يستغرق عدة أسابيع. نحن هنا يبرهن على وجود عدوى قراد microinjection المستندة إلى الإجراء الذي يمكن أن ينجز في غضون ساعات. نظهر أيضا أسلوب المناعي للتوطين في الموقع من burgdorferi باء داخل القراد.
Abstract
ويتسبب مرض لايم عن طريق العدوى مع الممرض burgdorferi البورلية ملتوية ، وهو الحفاظ على الطبيعة من قبل في دورة العدوى القراد القوارض 1. وقد تم تطوير نموذج التجزئة التي تنقلها الفئران 2 لدراسة مرض لايم في المختبر. بينما يمكن أن يصاب القراد السذاجة مع B. burgdorferi بواسطة إطعامهم على الفئران المصابة ، وعملية طرح الريش يستغرق عدة أسابيع أو أشهر ليكتمل. ولذلك ، وتطوير أسرع وأكثر كفاءة تقنيات عدوى التجزئة ، مثل إجراء microinjection المستندة إلى أداة هامة لدراسة مرض لايم 3،4. الإجراء يتطلب ساعات فقط لتوليد القراد المصابة ويسمح بالسيطرة على تسليم كميات متساوية من اللولبيات في فوج من القراد. هذا مهم خصوصا وأن الجيل باء القراد burgdorferi المصابة بواسطة عملية التغذية الطبيعية باستخدام الفئران فشل لضمان 100 ٪ نسبة العدوى والنتائج المحتملة في الاختلاف من عبء الممرض بين القراد فدان. وعلاوة على ذلك ، يمكن استخدام microinjection تصيب القراد مع B. burgdorferi يعزل في الحالات التي يكون فيها سلالة موهنة غير قادر على إنشاء العدوى في الفئران ، وبالتالي لا يمكن الحصول عليها بشكل طبيعي عن طريق القراد 5. ويمكن أيضا أن تستخدم هذه التقنية لتقديم مجموعة متنوعة من المواد البيولوجية الأخرى في القراض ، على سبيل المثال ، الأجسام المضادة المحددة أو الذين تقطعت بهم السبل الحمض النووي الريبي مزدوج 6. في هذه المقالة ، سوف نظهر للmicroinjection من القراد مع nymphal في المختبر ، نمت B. burgdorferi. سوف نقوم أيضا تصف طريقة لتوطين مسببات مرض لايم في الأمعاء القراد باستخدام المجهر مبائر المناعي.
Protocol
Discussion
هنا نظهر إجراء microinjection المستندة للعدوى سريعة وفعالة من القراد اللبود nymphal مع الممرض البكتيرية B. burgdorferi. وصفنا أيضا إجراء مبائر المناعي للكشف عن B. burgdorferi في الأمعاء التجزئة في الموقع. على الرغم من أن المظاهرة ينطوي على القناة الهضمية لدينا nymphal ، وإجراءا?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نشكر بإخلاص أعضاء مختبر بال للمساعدة في إعداد هذه التظاهرة. وأيد هذه الدراسة PHS المنح AI076684 من المعاهد الوطنية للصحة وAI080615 / المعدية.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glass capillary tubes | World Precision Instruments | TW100F-4 | ||
| Vertical glass puller | Narishige | PC-10 | ||
| Petroff-Hausser counting chamber | Hausser scientific | 3900 | ||
| Microloader pipette tips | Eppendorf | 930001007 | ||
| Femtojet microinjector | Eppendorf | 920010504 | ||
| Foot control FemtJet | Eppendorf | 920005098 | ||
| Phosphate buffered saline | Fisher Scientific | BP665-1 | Filter-sterilized |
References
- Steere, A. C., Coburn, J., Glickstein, L. The emergence of Lyme disease. J Clin Invest. 113, 1093-1101 (2004).
- Barthold, S. W., Diego, C., Philipp, M. T., Samuels, D. S., Radolf, J. D. . Borrelia, Molecular Biology, Host Interaction and Pathogenesis. , 353-405 (2010).
- Pal, U. OspC facilitates Borrelia burgdorferi invasion of Ixodes scapularis salivary glands. J Clin Invest. 113, 220-230 (2004).
- Yang, X. F., Pal, U., Alani, S. M., Fikrig, E., Norgard, M. V. Essential role for OspA/B in the life cycle of the Lyme disease spirochete. J Exp Med. 199, 641-648 (2004).
- Zhang, X., Yang, X., Kumar, M., Pal, U. BB0323 function is essential for Borrelia burgdorferi virulence and persistence through tick-rodent transmission cycle. J Infect Dis. 200, 1318-1330 (2009).
- Pal, U. TROSPA, an Ixodes scapularis receptor for Borrelia burgdorferi. Cell. 119, 457-468 (2004).
- Barbour, A. G. Isolation and cultivation of Lyme disease spirochetes. Yale J Biol Med. 57, 521-525 (1984).
- Narasimhan, S. Disruption of Ixodes scapularis anticoagulation by using RNA interference. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 1141-1146 (2004).
- Narasimhan, S. A tick antioxidant facilitates the Lyme disease agent’s successful migration from the mammalian host to the arthropod vector. Cell Host Microbe. 2, 7-18 (2007).
- Broadwater, A. H., Sonenshine, D. E., Hynes, W. L., Ceraul, S., DeSilva, A. Glass capillary tube feeding: a method for infecting nymphal Ixodes scapularis (Acari: Ixodidae) with the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi. J Med Entomol. 39, 285-292 (2002).
- Policastro, P. F., Schwan, T. G. Experimental infection of Ixodes scapularis larvae (Acari: Ixodidae) by immersion in low passage cultures of Borrelia burgdorferi. J Med Entomol. 40, 364-370 (2003).
- Fuente, d. e. l. a., Kocan, J., M, K., Almazan, C., Blouin, E. F. RNA interference for the study and genetic manipulation of ticks. Trends Parasitol. 23, 427-433 (2007).
