Valutazione dei comportamenti di interazione sociale

1. Attrezzature e Camera Set Up: L'apparecchio per la socialità Crawley e la preferenza per il test novità sociale è composta da una forma rettangolare, tre camere box. Ogni camera è di 19 x 45 cm e le pareti divisorie sono realizzate in plexiglas trasparente, con una sezione centrale aperto, che permette l'accesso gratuito per ogni camera. Usare due identici, filo-coppa come contenitori con coperchio rimovibile abbastanza grande per contenere un mouse. Questi sono posti verticalmente all'interno dell'apparato, uno in ogni camera laterale, e conterrà il mouse ingenuo / familiari. Ogni contenitore è costituito da fili metallici per consentire lo scambio d'aria tra l'interno e l'esterno delle interazioni dirette cilindro ma abbastanza piccolo per impedire che fisica tra un animale al suo interno con uno all'esterno. Test comportamentali devono essere effettuate 9:00-6:00. Illuminare tutto lo spazio è di 650 lux. Impiegano 6,0 Observer (Noldus) programma (o una valida alternativa) per monitorare e registrare l'osservazione e follow-up dei parametri, di cui al paragrafo 4.3. Dopo ogni prova, pulire tutte le camere con etanolo al 70% (tra topi) e poi con Clidox 01:05:01 (tra le gabbie) per evitare pregiudizi olfattivi spunto e per assicurare la disinfezione corretta, rispettivamente. La persona che fa l'osservazione deve essere di almeno 2 metri di distanza dall'apparecchio. 2. Animal Preparazione: Casa 3-5 topi per gabbia in una stanza con una 12 ore ciclo luce / buio (le luci alle 7:00) con accesso ad libitum a cibo e acqua, in base agli standard e ai requisiti di una guida locale Comitato Cura degli animali e dei protocolli. Trasferire tutte le gabbie contenenti topi nella stanza comportamentale 30 minuti prima del primo processo ha inizio. Ci sono due classi di mouse necessario per questo esperimento, uno che agisce come un ingenuo di controllo, o animale "unfamiliarized" e uno che è il soggetto di prova. Per il controllo del mouse utilizzare un mouse dello sfondo stesso (di solito C57BL6), età (di solito 8-12 settimane di età), sesso e peso, senza alcun contatto anteriore (non fratellini) con il mouse soggetto. Due topi di controllo sono obbligatori per esperimento, si è utilizzato per la sessione Io e un altro per la II sessione. I topi di controllo stesso può essere utilizzato tra le prove. 3. Assuefazione (adattamento): Isolare i compartimenti destra e sinistra utilizzando le pareti in plexiglass che divide. Posto vuoto tazze di contenimento del filo al centro della camera di destra e di sinistra (uno per ogni sito). Posizionare il mouse soggetto al centro della camera centrale per l'adattamento. Abituare per 5 minuti. 4. Affiliazione aspetto sociale della prova (I sessione): Posto uno dei topi di controllo ("Stranger 1") all'interno di una tazza di contenimento del filo che si trova in una delle camere laterali. Il posizionamento di Stranger 1 nel lato destro o sinistro della camera viene sistematicamente alterata tra prove. Rimuovere i muri tra i compartimenti, per consentire l'accesso gratuito per il mouse soggetti a esplorare ciascuna delle tre camere. Immediatamente iniziare il monitoraggio e la registrazione dei seguenti parametri: durata e numero di diretta (attivo) i contatti tra il mouse soggetto e l'alloggiamento tazza di contenimento o no che ospita il 1 mouse Straniero, per ogni camera singolarmente. Il contatto diretto tra il mouse soggetto e il calice di contenimento, o allungamento del corpo del mouse soggetto in una zona viene conteggiato 3-5 cm intorno alla tazza come un contatto attivo; durata e numero di altri comportamenti con il mouse soggetto in ciascun comparto, tra cui passeggiate, auto-governare, mancanza di movimenti del corpo per più di 5 secondi ("congelamento"), così come un comportamento insolito, come il salto, il comportamento ripetitivo, ecc; durata e numero di voci a ciascun comparto. Il mouse è considerato nella camera quando la sua testa e quattro zampe sono entrati nella camera. La durata della I sessione è di 10 minuti. 5. Sociale Novità / preferenza sessione del test (Sessione II): Posizionare un secondo mouse di controllo ("Stranger 2") all'interno di una coppa identica contenimento filo nella camera lato opposto (che era rimasta vuota durante la Sessione I). Monitorare gli stessi parametri descritti in 4.3, differenziare i comportamenti tra il mouse soggetto in presenza di Stranger 1 rispetto al Stranger 2. La durata della II sessione è di 10 minuti. 6. Analisi statistica: Usando il 6,0 programma origine (o di una valida alternativa) analizzare i seguenti parametri, utilizzando i dati registrati: il numero totale di contatti e durata totale di contatti tra MoU sperimentalee vuoti e di contenimento tazza vs o Stranger custodia tazza 1 (in sessione I), o tra il mouse sperimentale e l'alloggiamento coppa Stranger Stranger 1 vs 2 (in sessione II); durata media per contatto; numero totale e la durata di altri comportamenti (congelamento, auto-governare, a piedi) tempo totale speso dal soggetto del mouse in ogni compartimento. Analizzare le differenze significative per ciascuno dei suddetti parametri, confrontando i gruppi: Contenimento "Empty" tazza vs "Stranger 1" per un tipo selvaggio (WT) soggetto "Empty" tazza di contenimento "Stranger 1" vs per il mouse sperimentale (ad esempio un knockout, topo transgenico o farmaco-trattati, ecc.) "Stranger 1" "Stranger 2" vs per un soggetto WT "Stranger 1" "Stranger 2" vs per il mouse sperimentale (ad eliminazione diretta, transgenici, o farmaco-trattati, ecc.) Presentare ogni set di dati dei parametri di cui sopra come Sessione I: soggetti WT e sperimentali; Sessione II: WT e soggetti sperimentali, come mostrato nella Figura 1 (A e B) e 2 (A e B), rispettivamente. Si consiglia inoltre di prendere in considerazione altri parametri, che aiutano a standardizzare il test, come la precedente esperienza nel riconoscere i modelli del mouse specifiche comportamentali, come sniffing, governare, sfregamento, combattimento, il montaggio, che possono essere in gran parte dipendente soggettiva osservazione personale . La persona che funge da registratore dei parametri di comportamento durante il test deve essere cieco alle condizioni genotipo o di trattamento e le informazioni decodificate dopo. 7. Rappresentante dei risultati: Un esempio delle due fasi del test di interazione sociale è mostrata nelle figure 1 e 2. La prima sessione del test permette di stimare appartenenza sociale e motivazione del mouse soggetto. In questa parte del test, il mouse straniero era racchiuso in una tazza filo circolare che ha permesso il contatto naso, ma ha impedito gli scontri tra i topi. Queste condizioni assicurano che le politiche sociali sono iniziati con il mouse e soggetto sono di indagine solo, senza contatto fisico diretto. Il mouse ha la possibilità di passare più tempo intorno alla tazza di contenimento contenente il mouse straniero o per evitare qualsiasi contatto spostando al comparto con la tazza vuota. Altri parametri, quali il numero di contatti individuali, possono essere utilizzati in ulteriori durata trascorsa vicino al mouse straniero. Tipicamente, un tipo di animale selvatico passerà molto più tempo nel vano con Stranger 1 rispetto al vano con tazza vuota (Figura 1A), indicando socialità normale, la motivazione sociale e di affiliazione. In GSK-3α topi knockout, per esempio, non ci sono differenze significative tra il tempo trascorso con tazza vuota rispetto alla tazza contenente straniero 1 (Figura 1B), indicando socialità alterata in questi modelli animali 6. La seconda sessione del test è stato progettato per stimare novità sociale e della memoria sociale. In questa parte, il mouse soggetto ha una libera scelta tra il primo, già indagato, il mouse non familiare (Stranger 1), e un mouse romanzo familiare (Stranger 2). Di solito, un animale WT ricorda il suo precedente contatto con Stranger 1, e, in questa sessione, tende a passare più tempo con il mouse appena incontrato (Stranger 2), indicando intatta la memoria sociale e la predilezione per nuove esperienze (Figura 2A). A differenza dei topi wild-type, la GSK-3α animali mutanti non mostrano preferenza per la camera contenente un mouse di nuova introduzione (Stranger 2) in una camera contenente un mouse ormai familiare (Stranger 1) in sessione II (Figura 2B). Comportamento indifferente di topi KO in questo test è indicativo di ridotta motivazione sociale e novità. . Figura 1 Sessione I: appartenenza sociale e di socialità. Lunghezza media di tempo (± SEM) in camera con l'estraneo ("lato sconosciuto") rispetto alla camera opposta (lato "vuoto"). A differenza dei maschi WT (A), KO (B) gli animali non ha dimostrato una preferenza per la vicinanza sociale da passare il tempo stesso in entrambe le camere. *** P ≤ 0,0001 nel gruppo WT. Figura 2 Sessione II:. Memoria sociale e novità. La durata media del tempo (± SEM) in camera con il mouse non familiari dalla fase socialità ("Stranger 1") e nella camera opposta con un nuovo mouse non familiari ("Stranger 2"). A differenza dei maschi WT (A), KO (B) gli animali non ha dimostrato una preferenza per la novità sociale di trascorrere il tempo stesso in entrambe le camere. *** P ≤ 0,0001 nel gruppo WT.