Beoordeling van de sociale interactie gedrag

1. Apparatuur en Room Set Up: Het apparaat voor de gezelligheid Crawley's en de voorkeur voor sociale nieuwheidstest bestaat uit een rechthoekig, drie-kamer-box. Elke kamer is 19 x 45 cm en de scheidingswanden zijn gemaakt van helder plexiglas, met een open middengedeelte, die vrije toegang tot elke kamer staat. Gebruik twee identieke, draad cup-achtige containers met afneembare deksels die groot genoeg is om een ​​enkele muis vast te houden. Deze zijn verticaal geplaatst in het toestel, een in elke zijkamer, en zal de naïeve / onbekende muis bevatten. Elke container bestaat uit metalen draden om te zorgen voor de lucht-uitwisseling tussen de binnen-en buitenkant van de cilinder, maar klein genoeg om te voorkomen dat de directe fysieke interactie tussen een dier aan de binnenzijde met een aan de buitenkant. Behavioral testen dienen te worden uitgevoerd 9u00-18u00. Algemene verlichting is 650 lux. Dienst Observer 6.0 (Noldus) programma (of een geschikt alternatief), te controleren en registreren van de observatie-en follow-up parameters, vermeld in paragraaf 4.3. Na elke proef, schoon alle kamers met 70% ethanol (tussen muizen) en daarna met Clidox 01:05:01 (tussen de kooien) om olfactorische cue vooroordelen te voorkomen en om een ​​goede desinfectie respectievelijk te garanderen,. De persoon die de observatie moet minimaal 2 meter afstand van het apparaat. 2. Dier Bereiding: Huis drie tot vijf muizen per kooi in een kamer met een 12 uur licht / donker-cyclus (licht aan om 7.00 uur) met ad libitum toegang tot voedsel en water, volgens de normen en eisen van de lokale Animal Care Comite begeleiding en protocollen. Breng alle kooien met muizen in de gedrags-kamer 30 minuten voor de eerste proef begint. Er zijn twee klassen van de muis die nodig zijn voor dit experiment, een die fungeert als een controle, naïef of "unfamiliarized 'dier en een dat is de proefpersoon. Voor de controle muis een muis van dezelfde achtergrond (meestal C57Bl6), leeftijd (meestal 8-12 weken oud), geslacht en gewicht, zonder voorafgaande contact (niet nestgenoten) met het onderwerp muis. Twee controle muizen nodig zijn per experiment, een wordt gebruikt voor de sessie heb ik en een andere voor-sessie II. Dezelfde controle muizen kan worden gebruikt tussen de proeven. 3. Gewenning (adaptatie): Isoleer de rechter en linker compartimenten met behulp van de te verdelen plexiglas wanden. Plaats lege draad containment kopjes in het midden van de rechter en linker kamer (een per site). Plaats het onderwerp muis in het midden van de middelste kamer voor aanpassing. Wennen voor 5 minuten. 4. Sociale Aansluiting Aspect van de Test (sessie I): Plaats een van de controle muizen ("Stranger 1") in een draad containment kopje dat is gevestigd in een van de zijkamers. De plaatsing van een vreemdeling in de linker-of rechterkant van de kamer wordt systematisch veranderd tussen de proeven. Verwijder de muren tussen de compartimenten, zodat gratis toegang voor het onderwerp muis aan elk van de drie kamers te verkennen. Onmiddellijk beginnen met de controle en het opnemen van de volgende parameters: duur en aantal directe (actieve) contacten tussen het onderwerp muis en de insluiting beker behuizing of niet de huisvesting van de vreemdeling een muis, voor elke kamer afzonderlijk. Direct contact tussen het onderwerp muis en de insluiting beker, of strekken van het lichaam van het subject muis in een gebied 3-5 cm rondom de beker wordt geteld als een actief contact; duur en aantal andere gedragingen door het onderwerp muis in elk compartiment, zoals wandelen, zelf-verzorging, het ontbreken van elk orgaan bewegingen voor meer dan 5 seconden ("bevriezing"), evenals ongewoon gedrag, zoals springen, repetitief gedrag, enz.; duur en aantal inzendingen voor elk compartiment. De muis wordt beschouwd als in de kamer toen de kop en vier poten zijn aangegaan in de kamer. De duur van de sessie I is 10 minuten. 5. Sociale Novelty / voorkeur zitting van de Test (Session II): Plaats een tweede controle muis ("Stranger 2") in een identieke draad insluiting beker in de andere kant kamer (die was leeg tijdens de Sessie I). Monitor dezelfde parameters zoals beschreven in 4.3, waarbij een onderscheid tussen de gedragingen het onderwerp muis in de aanwezigheid van een vreemdeling in vergelijking met Stranger 2. De duur van de sessie II is 10 minuten. 6. Statistische analyse: Door het gebruik van de Origin 6,0 programma (of een geschikt alternatief), het analyseren van de volgende parameters met behulp van de geregistreerde gegevens: het totaal aantal contacten en totale duur van de contacten tussen experimentele mouse en lege insluiting cup vs of kopje huis Stranger 1 (in sessie I), of tussen experimentele muis en de beker huis Stranger Stranger 1 vs 2 (in sessie II); gemiddelde duur per contact; het totale aantal en de duur van ander gedrag (bevriezen, zelf-verzorging, lopen) totale tijd besteed door het onderwerp muis in elk compartiment. Analyseer de significante verschillen voor elk van de bovengenoemde parameters, door het vergelijken van de groepen: "Lege" containment cup vs "Stranger 1" voor een wild type (WT) onder voorbehoud "Lege" containment cup vs "Stranger 1" voor de experimentele muis (bijvoorbeeld een knock-out, transgene of medicijnen behandeld muis, etc.). "Stranger een" vs "Stranger 2" voor een WT onderwerp "Stranger een" vs "Stranger 2" voor de experimentele muis (knock-out, transgene of medicijnen behandeld, etc.). Presenteren elke dataset van de bovengenoemde parameters als Sessie I: WT en de proefpersonen; Sessie II: WT en experimentele onderwerpen, zoals weergegeven in figuur 1 (A en B) en 2 (A en B), respectievelijk. Het is ook raadzaam om rekening houden met andere parameters, die helpen bij het standaardiseren van deze test, zoals voorafgaande ervaring in het herkennen van specifieke muis gedragspatronen, zoals snuiven, verzorging, wrijven, vechten, montage, die kunnen worden grotendeels afhankelijk van subjectieve persoonlijke observatie . De persoon die als de recorder van de gedrags-parameters tijdens de test moet blind zijn voor het genotype of de behandeling voorwaarden en deze informatie daarna gedecodeerd. 7. Representatieve resultaten: Een voorbeeld van de twee stappen van de sociale interactie test wordt getoond in de figuren 1 en 2. De eerste sessie van de test maakt schatting van sociale aansluiting en de motivatie van het onderwerp muis. In dit deel van de test, was de vreemdeling muis opgesloten in een cirkelvormige draad beker die neus contact toegestaan, maar voorkomen dat de gevechten tussen muizen. Deze voorwaarden zorgen ervoor dat de sociale aanpak worden geïnitieerd door het onderwerp muis en zijn onderzoeks-alleen, zonder direct fysiek contact. De muis heeft de keuze om meer tijd rond de insluiting cup met de vreemdeling muis te brengen of om enig contact te vermijden door te verhuizen naar het compartiment met de lege beker. Andere parameters, zoals het aantal individuele contacten, kan worden gebruikt in aanvulling op de duur bracht de buurt van de vreemdeling muis. Typisch, een wild-type dier zal aanzienlijk meer tijd in het compartiment met een vreemdeling ten opzichte van het compartiment met lege beker (Figuur 1A), wat aangeeft normale gezelligheid, de sociale motivatie en aansluiting. In GSK-3α knockout muizen, bijvoorbeeld, zijn er geen significante verschillen tussen de bestede tijd met lege beker in vergelijking met de cup met een vreemdeling (Figuur 1B), wat aangeeft verminderde gezelligheid in deze dierlijke model 6. De tweede sessie van de test is bedoeld om sociale vernieuwing en sociale geheugen te schatten. In dit deel, het onderwerp muis heeft een vrije keuze tussen de eerste, reeds onderzocht, onbekende muis (Stranger 1), en een nieuwe onbekende muis (Stranger 2). Meestal een WT dier herinnert aan haar vroegere contact met Stranger 1, en in deze sessie, de neiging om meer tijd te besteden met de nieuw aangetroffen muis (Stranger 2), wat aangeeft intact sociaal-geheugen en voorliefde voor nieuwe ervaringen (figuur 2A). In tegenstelling tot de wild-type muizen, doe GSK-3α mutant dieren niet zien voorkeur voor de kamer met daarin een nieuw geïntroduceerde muis (Stranger 2) over een kamer met een inmiddels bekende muis (Stranger 1) in de sessie II (Figuur 2B). Onverschillige gedrag van KO muizen in deze test is een indicatie van verminderde motivatie en sociale vernieuwing. . Figuur 1 Sessie I: sociale affiliatie en gezelligheid. De gemiddelde lengte van de tijd (± SEM) in de kamer met de vreemdeling ('vreemdeling zijde ") in vergelijking met de andere kamer (" lege kant "). In tegenstelling tot WT mannen (A), KO (B) dieren niet in geslaagd een voorkeur voor sociale nabijheid te tonen door het uitgeven van hetzelfde moment in beide kamers. *** P ≤ 0,0001 in WT-groep. Figuur 2 Sessie II:. Sociale geheugen en nieuwheid. Gemiddelde duur van de tijd (± SEM) in de kamer met de onbekende muis van de gezelligheid fase ("Stranger 1") en in de tegenovergestelde kamer met een nieuwe onbekende muis ("Stranger 2"). In tegenstelling tot WT mannen (A), KO (B) dieren niet in geslaagd een voorkeur voor sociale vernieuwing aan te tonen door het uitgeven van hetzelfde moment in beide kamers. *** P ≤ 0,0001 in WT-groep.