Um Método para o alternante dos membros posteriores NASA modelo tradicional de Descarga em Ratos

Cirurgia pré-Instrumentos / Materiais Cortadores de fio / alicates Gaze 2 x 2 "pads Almofada de aquecimento Prata nitrato de varas Luvas cirúrgicas estéreis Isoflurano inalatório Gluconato de clorexidina 4% (matagal cirúrgica anti-séptico) Estéril 2-0 sutura aço cirúrgico 25 X 5 / 8 agulha Um medidor (autoclavado) Hemostat (autoclavado) Sutura aço cirúrgico Procedimento Cirúrgico Criar um campo estéril. Seguir o procedimento estéril. Anestesiar mouse com 2-3% de isoflurano. Lugar do mouse sobre a almofada de aquecimento. Scrub cauda com solução de clorexidina. Localize 5, 6 ou 7 º espaço intervertebral (entre duas protuberâncias ósseas na cauda, ​​começam a contar a partir do final de pêlos no corpo, na base da cauda). Use hemostat e agulha 25G para fazer um furo piloto entre duas vértebras, para o espaço intervertebral. Use o alicate para cortar o fio de aço 10 cm de comprimento. Remova a agulha de sutura de aço e inserir através do orifício, 5 cm de sutura em cada extremidade da cauda. Cada lado da cauda deve ter + 5 cm de sutura. Mergulhe a ponta do polegar até a cauda. Use sua mão livre e vento a sutura de aço na ponta de seu polegar e torça as pontas para formar um laço grande. A parte ferida ou circular deve ser + 3 mm de comprimento. Retire o seu polegar. Pinça um fio de sutura com o hemostat e dobrá-la em um pequeno laço, a fim de que está ligado o mais próximo possível ao torção no loop original de grande porte. Cortar fios em excesso, e dobrar o fio torcido para trás. Se houver qualquer sangramento em excesso, pode pará-lo com as varas de nitrato de prata. Desligue o mouse isoflurano e coloque em uma gaiola única casa para se recuperar de 5-7 dias antes do membro posterior descarga. Os anéis da cauda entalada se mais de um mouse é alojados juntos. 1. Membro posterior procedimento de descarregamento Materiais Tamanho 24/10 X 4 parafusos, um por animal. Nylon tamanho porca 10-24, uma por animal. Asa castanha tamanho 10 X 24, dois por animal. Tamanho da anilha ¼ X 1, duas por animal. Giratória de pesca com tamanho Gancho # 6, 1-11/16 ", e um animal por. Máquina de costura de metal da bobina. Um animal por. Clipe de papel pequeno para S-shaped gancho, um por animal Alicates. 2 x 2 gaze ". 2 "braçadeiras aglutinante de papel preto. Fita tape / laboratório duto. 1-3/8 "bar em aço galvanizado com fenda que se estende um pouco além do comprimento total da gaiola 50cm x 40cm x 20cm gaiola (gaiola de rato). Garrafa de água com tubo dobrado. Fio de aço inoxidável, em forma de U para apoiar garrafa de água. Setup gaiola Estabelecer as 1-38 "bar em aço galvanizado com fenda por cima da gaiola, e fita-lo temporariamente para baixo com fita adesiva. Parafuso 1 porca borboleta para o parafuso de máquina, inserir uma máquina de lavar, e insira o parafuso de máquina através da chapa de aço encaixados ± 15 cm da borda da gaiola. Adicionar outra arruela e porca de asa. Aperte as porcas tanto asa, mas não aperte, pois será necessário fazer ajustes posteriores. Insira o parafuso de máquina através do orifício centro da bobina. Para evitar que a bobina de cair, o parafuso porca de nylon para o final do parafuso da máquina. A bobina deve girar livremente. Insira o gancho do giro de pesca através da parte inferior da bobina. Use um alicate para formar um gancho em forma de S a partir do clipe. (Corte dois centímetros do clipe de papel para formar um gancho). Insira uma ponta do anzol em forma de S através do orifício da peça giratória de pesca e pinch-la fechada com o alicate. Coloque o fio em forma de U, em paralelo com o parafuso, no interior do lado da gaiola, e dobre as pontas para trás para suportar uma garrafa de água cheia. Inserir a garrafa de água no fio em forma de U, com o spicket virada para baixo, mas não tocando o fundo. Dobre os dois "binder clamp aberto, de modo que não pode fechar perto. Apenas a tensão suficiente para manter 3-4 pedaços de comida na mesma sem ele cair. Esta é impedir a força da pinça de esmagamento do alimento, ou reprimir o nariz mouse. Coloque 3-4 pedaços de para roedores no grampo ligante. Membro posterior descarga de Mouse Inserir a extremidade aberta do gancho em forma de S através do anel menor do anel da cauda. Ajuste a altura do mouse, apertar ou afrouxar a porca inferior da asa no parafuso da máquina. As extremidades inferiores não deve ser rolamento do peso. Uma vez que a altura ideal é alcançada aperte a porca de asa superior. Reposicionar a garrafa de água, e em forma de U de fio para que o mouse não pode subir no spicket com seus membros posteriores. Segura a garrafa de água com fita adesiva para o lado da gaiola. Posição do grampo fichário com comida no fundo da gaiola para que o mouse não pode subir nela; tape-a com fita adesiva. Repita o mesmo procedimento se mais de um animal é descarregado hindlimb do outro lado da gaiola. Casa de dois animais por gaiola, espaço os animais para que eles possam quase se tocam. Use a 2 X 2 gaze para enrole frouxamente a cauda do mouse sobre o giro de peixe. Use um pequeno pedaço de fita para envolver a gaze, garantir a gaze para a cauda. Este passo é importante para evitar a cauda de drooping para baixo, levando ao acúmulo de sangue na ponta da cauda e que a cauda se tornar necrótico. Adicionar uma pequena quantidade de cama cob para a jaula. Não adicione cama muito caso contrário o mouse de um monte de roupa de cama e tentar carregar hindlimbs na cama. 2. Resultados representativos: Para estabelecer o sucesso da técnica HU cauda anel medimos massa corporal do animal antes da cirurgia anel cauda, ​​e antes e depois HU e recuperação; sóleo massa muscular e massa adrenal em todos os grupos. Peso corporal dos camundongos durante o experimento são mostrados na Figura 1. Peso corporal dos camundongos antes da cirurgia anel da cauda (24,7 ± 3,5 g) não foram significativamente diferentes após 5 dias de recuperação da cirurgia do anel da cauda (24,3 ± 2.9g) antes do HU. Nem o peso corporal significativamente declínio imediatamente após 14 dias de HU (22,7 ± 1,9 g), 28 dias de HU (21,3 + 2.1g) ou depois de 3 dias a partir da recuperação HU (24,0 ± 1,8 g). Embora HU para 14 e 28 dias, resultou em uma pequena perda (-6,8% e 12%), mas não significativo na massa corporal, os ratos totalmente recuperado de sua pré-HU peso corporal após 3 dias de recuperação. Consumo de alimento para ratos e camundongos controle ambulatorial HU é mostrado na Figura 3. Ingestão média diária de alimento não foi diferente em camundongos HU mais de 28 dias em comparação aos controles. Observou-se atrofia muscular significativa sóleo seguintes HU para 14 e 28 dias (-39,1% e -46,6%), indicando um procedimento eficaz HU (Figura 2). Além disso, este grau de atrofia é consistente com os valores esperados para a literatura 2-4 semanas de HU 2, 7, 8. Após três dias de recuperação da HU sóleo massa aumentou significativamente para 74% dos valores controle. Sóleo em massa no grupo de recuperação foi significativamente maior que os grupos de ambos os HU, mas ainda assim significativamente menos do que animais do grupo controle ambulatorial. Adrenal pesos foram medidos como um indicador do estresse animal; ambas as glândulas supra-renais esquerda e direita foram excisados ​​e pesados. Os pesos médios foram comparáveis ​​para o controle de ratos e camundongos HU em todos os grupos (Figura 4). Anteriormente em ratos que mostraram que a taxa de sucesso para o número de animais no início do HU em relação ao número de animais que completou HU sem sair do aparelho de suspensão (devido à mastigação animais através da fita cauda-tração) foi de 10 out de 12 usando a técnica de Morey-Holton 1. Nenhum dos ratos (n = 54) neste estudo já desceu da suspensão antes do término do período HU. Fizemos no entanto, têm um rato que que desenvolveu uma cauda muito inflamada. Quando a inflamação se tornou evidente, nós removemos o anel da cauda para permitir que a área inflamada para curar, e posteriormente colocadas uma outra cauda anel para completar a duração do HU. No passado, quando nós usamos o método Morey-Holton do HU, que normalmente 1-2 eliminar ratos / grupo, porque eles saem do aparelho de suspensão. Com o método de fuga de anel não houve episódios de ratos, inadvertidamente, que sai do aparelho HU durante o período de HU para 14 ou 28 dias (n = 54 ratos). Figura 1. Corporal Alterações Peso (média ± DP). Abreviaturas: CON: ratos peso-rolamento controle (n = 76); Pré-HU: todos os camundongos antes de HU (n = 54); HU14: hindlimb ratos descarregado por 14 dias (n = 34); HU28: hindlimb ratos descarregado para 28 dias (n = 20); REC: ratos hindlimb descarregado permitido recuperar gaiola por 3 dias (n = 22). Não houve diferenças significativas no peso corporal foram observadas entre os grupos. Figura 2. Atrofia músculo sóleo (média ± DP). Abreviaturas: CON: ratos peso-rolamento controle (n = 76); HU14: hindlimb ratos descarregado por 14 dias (n = 34); HU28: hindlimb ratos descarregado por 28 dias (n = 20) e REC: ratos hindlimb descarregado permitido a gaiola recuperar durante 3 dias (n = 22). * Significativamente diferente (p <0,001) do peso-rolamento de controle (CON). δSignificantly diferentes (p <0,01) do que ambos os grupos HU. 467fig3.jpg "alt =" Figura 3 "/> Figura 3 Consumo Alimentar. (Média ± DP). Ingestão de alimentos médio diário (g / dia) durante peso-rolamento e descarga hindlimb. Abreviaturas: ratos peso-rolamento controle (n = 76); HU: ratos hindlimb unloaded14 – 28 dias. Não houve diferenças significativas entre os grupos CON e HU foram observados. Figura 4. Massa Adrenal (média ± DP). Abreviaturas: CON: ratos peso-rolamento controle (n = 76); HU14: hindlimb ratos descarregado por 14 dias (n = 34); HU28: hindlimb ratos descarregado por 28 dias (n = 20) e REC: ratos hindlimb descarregado permitido a gaiola recuperar durante 3 dias (n = 22). Não foram observadas diferenças significativas entre os grupos.