Un metodo alternant al tradizionale modello della NASA arti posteriori di scarico in topi

Pre-Chirurgia Strumenti / Materiali Tagliafili / pinze Garza 2 x 2 "pastiglie Riscaldamento pad Bastoncini di nitrato d'argento Guanti chirurgici sterili Isoflurano anestetiche per via inalatoria Clorexidina gluconato 4% (antisettico lavaggio chirurgico) Sterile 2-0 sutura acciaio chirurgico 25 X 5 / 8 A gauge (autoclavato) Hemostat (autoclavato) Acciaio sutura chirurgica Procedura di chirurgia Creare un campo sterile. Seguire la procedura sterile. Anestetizzare il mouse con 2 – 3% isoflurano. Posizionare il mouse sul pad riscaldamento. Scrub coda con una soluzione di clorexidina. Individuare 5, 6 o 7 ° spazio intervertebrale (tra due gobbe ossea sulla coda, inizia a contare dalla fine di peli sul corpo, alla base della coda). Usa hemostat e ago 25G per fare un foro pilota tra due vertebre, nello spazio intervertebrale. Utilizzare i tronchesi per tagliare la sutura in acciaio 10 cm. Rimuovere l'ago ed inserire sutura in acciaio attraverso il foro, 5 cm di sutura su entrambe le estremità della coda. Ogni lato della coda dovrebbe avere + 5 cm di sutura. Luogo punta del pollice sulla coda. Usa la tua mano libera e il vento la sutura in acciaio sulla punta del pollice e ruotare le estremità per formare un grande anello. La parte ferita o circolare deve essere + 3 mm di lunghezza. Rimuovere il pollice. Morsetto un filo di sutura con la hemostat e piegare in un ciclo più piccolo, alla fine del quale è collegato il più vicino possibile alla torsione sul circuito originale di grandi dimensioni. Tagliare il cavo in eccesso, e piegare il filo intrecciato dietro. Se c'è un eccesso di sanguinamento, è possibile fermare con i bastoni nitrato d'argento. Spegnere il mouse isoflurano e posto in una gabbia singola casa a recuperare per 5-7 giorni prima di scarico degli arti posteriori. Gli anelli di coda rimanere impigliato se più di un topo è alloggiato insieme. 1. Procedura di scarico degli arti posteriori Materiale Dimensioni 10-24 x 4 viti, una per ogni animale. Nylon Dado di blocco dimensioni 10-24, uno per ogni animale. Dado di ala misura 10 x 24, due per ogni animale. Rondella ¼ X 1, due per ogni animale. Girevole di pesca con dimensioni moschettone # 6, 1-11/16 ", e un animale per. Metallo macchina da cucire bobina. Un animale per. Graffetta piccola per S a forma di gancio, una per ogni animale Pinze. 2 x "garza 2. 2 "nero carta legante morsetti. Duct tape / lab nastro. 1-3/8 "bar in acciaio placcato scanalato che si estende leggermente oltre la lunghezza della gabbia 50cm X 40cm x 20cm gabbia (gabbia di ratto). Bottiglia d'acqua con tubo piegato. Filo di acciaio inossidabile, a forma di U per supportare bottiglia d'acqua. Gabbia di installazione Posare il "1-38 bar in acciaio placcato scanalato sopra la parte superiore della gabbia, e nastro temporalmente giù con del nastro adesivo. Vite 1 galletto alla vite della macchina, inserire una rondella, e inserire la vite attraverso la macchina in lamiera di acciaio scanalato ± 15 cm dal bordo della gabbia. Aggiungere un altro rondella e dado ad alette. Stringere entrambi galletti, ma non serrare, in quanto sarà necessario fare aggiustamenti successivi. Inserire la vite di macchina attraverso il foro centrale della bobina. Per evitare che la bobina di cadere, avvitare il dado di bloccaggio in nylon fino alla fine della vite di macchina. La bobina deve girevole liberamente. Inserire il gancio girevole dalla pesca attraverso la parte inferiore della bobina. Utilizzare pinze a formare una S a forma di gancio dalla graffetta. (Tagliare due centimetri dalla clip di carta a formare un gancio). Inserire un'estremità del S a forma di uncino nel foro della pesca girevole e un pizzico si chiuse con le pinze. Posizionare il filo a forma di U, parallelamente alla vite della macchina, sulla parte interna del lato della gabbia, e piegare il back end per supportare una bottiglia piena d'acqua. Inserire l'acqua in bottiglia a forma di U a filo, con il spicket rivolto verso il basso, ma non toccare il fondo. Piegare le 2 "legante morsetto aperto, in modo che non può chiudere chiudere. Basta tensione sufficiente per contenere 3 a 4 pezzi di cibo in esso senza cadere. Questo è prevenire la forza della pinza da schiacciare il cibo, o reprimere il il mouse naso. Posto 3 a 4 pezzi di roditore chow nel morsetto legante. Arti posteriori di scarico di Mouse Inserire l'estremità aperta del S a forma di uncino attraverso l'anello più piccolo dell'anello di coda. Regolare l'altezza del mouse svitando o avvitando il dado sulla vite inferiore della macchina. Le estremità inferiori non deve essere carico. Una volta che l'altezza ottimale si ottiene serrare il dado superiore dell'ala. Riposizionare la bottiglia d'acqua, e U filo in modo che il topo non può salire sul spicket con le sue arti posteriori. Fissare la bottiglia d'acqua con del nastro adesivo al lato della gabbia. Posizionare il morsetto legante con il cibo sul fondo della gabbia in modo che il mouse non si può salire su di essa; nastro giù con del nastro adesivo. Ripetere la stessa procedura se più di un animale è scaricato arti posteriori sul lato opposto della gabbia. Casa di due animali per gabbia, spazio agli animali in modo che possano quasi si toccano. Utilizzare il X 2 2 garza per avvolgere liberamente la coda del mouse sul girevole pesce. Utilizzare un piccolo pezzo di nastro per avvolgere la garza, la garza di fissaggio alla coda. Questo passo è importante per evitare la coda da cadenti verso il basso, portando ad una pozza di sangue nella punta della coda e che la coda di divenire necrotico. Aggiungere una piccola quantità di biancheria da letto pannocchia alla gabbia. Non aggiungere letto troppo altrimenti il ​​mouse da un cumulo di biancheria da letto e cerca di caricare arti posteriori sul letto. 2. Rappresentante dei risultati: Per stabilire il successo della coda-ring tecnica HU abbiamo misurato peso corporeo degli animali prima della chirurgia anello coda, e prima e dopo HU e recupero; massa muscolare soleo e massa surrenalica in tutti i gruppi. Del peso corporeo dei topi per tutto l'esperimento sono mostrati in Figura 1. Del peso corporeo dei topi prima dell'intervento anello di coda (24,7 ± 3,5 g) non sono risultati significativamente differenti dopo 5 giorni di recupero da un intervento chirurgico anello coda (24,3 ± 2.9g) prima di HU. Né il peso corporeo in modo significativo declino subito dopo 14 giorni di HU (22,7 ± 1.9g), 28 giorni di HU (21,3 + 2,1 g) o dopo 3 giorni dalla ripresa HU (24,0 ± 1,8 g). Anche se HU per 14 e 28 giorni ha comportato una piccola perdita (-6,8% e il 12%) ma non significativo in massa corporea, i topi completamente recuperato alla loro pre-HU del peso corporeo dopo 3 giorni di recupero. Consumo di cibo per topi di controllo ambulatoriale e topi HU è mostrata in Figura 3. Media giornaliera di cibo non era differente nei topi HU nell'arco di 28 giorni rispetto ai controlli. Abbiamo osservato significativa atrofia muscolo soleo seguenti HU per il 14 e 28 giorni (-39,1% e -46,6%) che indica una procedura efficace HU (Figura 2). Inoltre questo grado di atrofia è coerente con i valori attesi letteratura per 2-4 settimane di HU 2, 7, 8. A seguito di 3 giorni di recupero da HU soleo di massa significativamente aumentata al 74% dei valori di controllo. Soleo di massa nel gruppo di recupero era significativamente maggiore rispetto ai due gruppi HU, ma ancora significativamente inferiore rispetto agli animali di controllo ambulatoriale. Surrenali pesi sono stati misurati come indicatore dello stress degli animali, sia le ghiandole surrenali a destra e sinistra sono stati asportati e pesato. I pesi medi erano paragonabili per il controllo e topi HU topi in tutti i gruppi (Figura 4). In precedenza nei ratti abbiamo dimostrato che il tasso di successo per il numero di animali all'inizio del HU rispetto al numero di animali che hanno completato HU senza uscire di apparecchi sospensione (a causa di animali masticazione attraverso la coda di trazione del nastro) è stato 10 su di 12 con il Morey-Holton tecnica 1. Nessuno dei topi (n = 54) in questo studio mai sceso dal sospensione prima del completamento del periodo di HU. Abbiamo fatto comunque, hanno un mouse che ha sviluppato una coda severamente infiammate. Quando l'infiammazione è diventato evidente, abbiamo rimosso l'anello di coda per consentire la zona infiammata di guarire, e successivamente immesse un'altra coda-ring per completare la durata di HU. In passato, quando abbiamo usato la Morey-Holton metodo di HU, di solito 1-2 eliminare i topi / gruppo perché escono dell'apparato sospensione. Con il sentiero ad anello metodo non ci sono stati episodi di topi inavvertitamente uscendo dell'apparato HU durante il periodo di HU per 14 o 28 giorni (n = 54 topi). Figura 1. Cambiamenti del peso corporeo (media ± DS). Abbreviazioni: CON: peso-cuscinetto topi di controllo (n = 76); Pre-HU: tutti i topi prima di HU (n = 54); HU14: arti posteriori topi scaricati per 14 giorni (n = 34); HU28: arti posteriori topi scaricati per 28 giorni (n = 20); REC: topi arti posteriori scaricato permesso di recuperare gabbia per 3 giorni (n = 22). Nessuna differenza significativa nel peso corporeo è stata osservata tra i gruppi. Figura 2. Soleo atrofia muscolare (media ± DS). Abbreviazioni: CON: peso-cuscinetto topi di controllo (n = 76); HU14: arti posteriori topi scaricati per 14 giorni (n = 34); HU28: arti posteriori topi scaricati per 28 giorni (n = 20); e REC: topi arti posteriori scaricato permesso per recuperare gabbia per 3 giorni (n = 22). * Significativamente diversi (p <0,001) rispetto al peso-cuscinetto di controllo (CON). δSignificantly differenti (p <0,01) di entrambi i gruppi HU. 467fig3.jpg "alt =" Figura 3 "/> Figura 3. Consumo alimentare (media ± DS). Media giornaliera di alimenti (g / die) durante peso-cuscinetto e lo scarico degli arti posteriori. Abbreviazioni: peso-cuscinetto topi di controllo (n = 76); HU: topi arti posteriori unloaded14 – 28 giorni. Nessuna differenza significativa tra i gruppi HU CON e sono stati osservati. Figura 4. Messa surrenale (media ± DS). Abbreviazioni: CON: peso-cuscinetto topi di controllo (n = 76); HU14: arti posteriori topi scaricati per 14 giorni (n = 34); HU28: arti posteriori topi scaricati per 28 giorni (n = 20); e REC: topi arti posteriori scaricato permesso per recuperare gabbia per 3 giorni (n = 22). Nessuna differenza significativa è stata osservata tra i gruppi.