Eine alternierende Methode, um die traditionelle NASA Hinterlauf Entladen Modell in Mäusen

Pre-Chirurgie-Instrumente / Materialien Drahtschneider / Zange Gauze 2 x 2 "-Pads Heizkissen Silbernitrat-Sticks Sterile OP-Handschuhe Isofluran Inhalationsnarkose Chlorhexidingluconat 4% (Antiseptische chirurgische Macchia) Sterile 2-0 chirurgischem Stahl Naht 25 X 5 / 8 A-Gauge-Nadel (autoklaviert) Hemostat (autoklaviert) Chirurgischer Stahl Naht Chirurgie Procedure Erstellen Sie einen sterilen Bereich. Folgen Sie sterile Verfahren. Anesthetize Maus mit 2 bis 3% Isofluran. Bewegen Sie die Maus auf dem Heizkissen. Scrub Schwanz mit Chlorhexidin-Lösung. Suchen Sie 5, 6, oder 7 th Zwischenwirbelraum (zwischen zwei knöchernen Höcker auf Schwanz, dem Zählen beginnen ab Ende der Körperbehaarung, an der Basis der Schwanz). Verwenden Sie Hemostat und 25G-Nadel auf eine Pilotbohrung zwischen zwei Wirbeln zu machen, in den Zwischenwirbelraum. Verwenden Sie die Drahtschere auf die Stahl-Naht 10 cm langen Schnitt. Entfernen Sie die Nadel und stecken Stahl Naht durch das Loch, 5 cm der Naht auf beiden Seiten des Schwanzes. Jede Seite des Schwanzes sollte + 5 cm der Naht. Legen Sie Ihren Daumen Spitze auf Schwanz. Verwenden Sie Ihre freie Hand und Wind die Stahl-Naht auf die Spitze des Daumens und die Enden zu einem großen Schleife zu bilden. Die Wunde oder kreisförmigen Teil sollte + 3 mm lang sein. Nehmen Sie Ihren Daumen. Clamp einem Strang der Naht mit dem hemostat und biegen sie in eine kleinere Schlinge, deren Ende so eng wie möglich ist, die Wendung auf die ursprüngliche große Schleife angebracht. Cut off überschüssigen Draht und biegen Sie die verdrillten Draht zurück. Wenn es einen Überschuss Blutungen, können Sie es mit der Silbernitrat-Sticks zu stoppen. Schalten Sie die Isofluran und Ort Maus in einem Einfamilienhaus Käfig für 5-7 Tage vor dem Hinterlauf Entladen zu erholen. Der Schwanz Ringe verfangen, wenn mehr als eine Maus zusammen untergebracht ist. 1. Hinterlauf Entladevorgang Materialien Größe 10-24 x 4 Schrauben, je eine pro Tier. Nylon Kontermutter Größe 10 bis 24, je eine pro Tier. Flügelmutter Größe 10 X 24, zwei pro Tier. Washer Größe ¼ X 1, zwei pro Tier. Angeln Wirbel mit Karabinerhaken Größe # 6, 1-11/16 ", und man pro Tier. Metall-Nähmaschine Spule. Einer pro Tier. Kleine Büroklammer zum S-förmigen Haken, eine pro Tier Zangen. 2 x 2 "Gaze. 2 "schwarzes Papier Bindemittel Klammern. Klebeband / lab Band. 1-3/8 "Plated geschlitzten Stahlstange, die etwas über die volle Länge des Käfigs reicht 50cm x 40cm x 20cm Käfig (Rattenkäfig). Trinkflasche mit gebogenem Rohr. Edelstahl-Draht, U-förmig, um Wasserflasche zu unterstützen. Cage-Setup Legen Sie den 1-38 "Plated geschlitzten Stahl bar über der Oberseite des Käfigs, und kleben Sie es zeitlich unten mit Klebeband. Schraube 1 Flügelmutter an der Maschine Schraube, legen Sie eine Scheibe, und legen Sie die Maschine Schneckentrog den geschlitzten Stahlplatte ± 15 cm vom Rand des Käfigs. Add another Unterlegscheibe und Flügelmutter. Ziehen Sie die beiden Flügelmuttern, aber nicht ganz festziehen, wie es nötig ist, um Anpassungen später tun. Legen Sie die Maschine Schraube durch das mittlere Loch der Spule. Um zu verhindern, die Spule herunterfallen, schrauben Sie die Nylon-Sicherungsmutter bis zum Ende der Maschine Schraube. Die Spule sollte frei drehen. Legen Sie die Karabinerhaken aus den Angeln Schwenk durch den unteren Teil der Spule. Mit einer Zange eine S-förmige Haken von der Büroklammer zu bilden. (Cut 2cm von der Büroklammer an einen Haken zu bilden). Legen Sie das eine Ende des S-förmigen Haken durch das Loch des Fischerdorfes schwenk-und kneifen sie geschlossen mit der Zange. Legen Sie die U-förmigen Draht, parallel zur Maschine Schraube, an der Innenseite des Käfigs Seite und biegen Sie die Enden wieder auf eine volle Wasserflasche zu unterstützen. Legen Sie die Flasche Wasser in die U-förmigen Draht, mit dem Spicket nach unten, aber nicht den Boden berührt. Biegen Sie die 2 "Bindemittel Klammer zu öffnen, so dass sie nicht in der Nähe geschlossen. Gerade genug Spannung, um 3 bis 4 Stücke von Lebensmitteln in ihr zu halten, ohne sie fallen aus. Dies verhindert, dass die Kraft der Klemme vom Zerkleinern der Nahrung oder ein strengeres Vorgehen gegen der Maus die Nase. Legen Sie 3 bis 4 Stücke von Nagetier chow in das Bindemittel zu klemmen. Hinterlauf Entladen von Maus Legen Sie das offene Ende des S-förmigen Haken durch den kleineren Ring des Schwanzes Ring. Stellen Sie die Maus Höhe durch Anziehen oder Lösen der unteren Flügelmutter an der Maschine Schraube. Die unteren Extremitäten sollte kein Gewicht tragen werden. Sobald die optimale Höhe erreicht ziehen Sie die obere Flügelmutter. Positionieren Sie die Wasserflasche, und U-förmigen Draht, so dass die Maus nicht auf die Spicket klettern mit ihren Hinterbeinen. Sichern Sie die Wasserflasche mit Klebeband an der Seite des Käfigs. Position des Bindemittels Schelle mit Essen auf den Boden des Käfigs, so dass die Maus nicht auf ihn zu besteigen, Band ihn mit Klebeband. Wiederholen Sie diesen Vorgang, wenn mehr als ein Tier ist Hinterbein auf der anderen Seite des Käfigs entladen. Haus zwei Tiere pro Käfig; Raum die Tiere so, dass sie fast berühren kann sich gegenseitig. Verwenden Sie die 2 X 2 Gaze lose wickeln den Schwanz der Maus auf die Fische zu schwenken. Mit einem kleinen Stück Klebeband, um rund um die Gaze wickeln, die Sicherung der Gaze auf den Schwanz. Dieser Schritt ist wichtig, um den Schwanz von hängenden nach unten zu verhindern, was zu Blut-Pooling in der Spitze des Schwanzes und Schwanz es nekrotisch. Fügen Sie eine kleine Menge von cob Betten in den Käfig. Fügen Sie nicht zu viel Einstreu sonst die Maus aus einem Haufen Bettzeug und versuchen, Hinterbeine auf Einstreu zu laden. 2. Repräsentative Ergebnisse: Zur Ermittlung der Erfolg der Schwanz-Ring HU Technik, die wir gemessen Körpergewicht des Tieres vor dem Schwanz Ring Chirurgie und vor und nach der HU und Verwertung; soleus Muskelmasse und Nebennieren Masse in allen Gruppen. Das Körpergewicht der Mäuse während des Experiments sind in Abbildung 1 dargestellt. Das Körpergewicht der Mäuse vor dem Schwanz Ring Chirurgie (24,7 ± 3,5 g) unterschieden sich nicht signifikant nach 5 Tagen der Erholung von der Schwanz Ring Chirurgie (24,3 ± 2,9 g) vor der HU. Auch nicht das Körpergewicht signifikant sofort Rückgang nach 14 Tagen HU (22,7 ± 1,9 g), 28 Tage von HU (21,3 + 2,1 g) oder nach 3 Tagen Erholung von HU (24,0 ± 1,8 g). Obwohl HU für 14 und 28 Tage führte zu einer kleinen (-6,8% bzw. 12%), aber nicht signifikanten Verlust an Körper-Masse, die Mäuse voll auf ihre Vor-HU Körpergewicht nach 3 Tagen der Erholung erholt. Verzehr von Lebensmitteln für die ambulante Kontroll-Mäusen und HU-Mäusen ist in Abbildung 3 dargestellt. Durchschnittliche tägliche Futteraufnahme war nicht anders in HU-Mäuse über 28 Tage im Vergleich zur Kontrollgruppe. Wir beobachteten signifikanten soleus Muskelatrophie folgenden HU für 14 und 28 Tagen (-39,1%, -46,6% und), was eine effektive HU-Verfahren (Abb. 2). Des Weiteren wird diese Grad der Atrophie ist konsistent mit der erwarteten Literaturwerte für 2-4 Wochen nach der HU 2, 7, 8. Nach 3-tägiger Erholung von HU soleus Masse deutlich auf 74% der Kontrollwerte. Soleus Masse in die Erholung Gruppe war wesentlich größer als die beiden HU-Gruppen, aber immer noch deutlich weniger als ambulante Kontrolltieren. Adrenal Gewichte wurden als Indikator für das Tier Stress gemessen; sowohl die linke und rechte Nebenniere wurden ausgeschnitten und gewogen. Die durchschnittliche Gewichte waren vergleichbar für Steuerungs-und HU-Mäusen Mäuse in allen Gruppen (Abbildung 4). Zuvor bei Ratten haben wir gezeigt, dass die Erfolgsquote für die Anzahl der Tiere zu Beginn der HU, die Zahl der Tiere, die HU ohne Coming Out der Aufhängevorrichtung abgeschlossen (wegen Tieren Kauen durch den Schweif-Traktion Band) verglichen wurde, 10 aus von 12 mit dem Morey-Holton Technik 1. Keine der Mäuse (n = 54) in dieser Studie, die jemals kam aus der Suspension vor der Fertigstellung der HU Zeitraum. Wir haben jedoch einen Maus, die das entwickelte ein stark entzündeter Schwanz. Wenn die Entzündung deutlich wurde, entfernten wir den Schwanz Ring, damit die entzündete Stelle zu heilen, und anschließend platziert anderen tail-Ring, um die Dauer der HU abgeschlossen. In der Vergangenheit, wenn wir die Morey-Holton Methode der HU verwendet, wir in der Regel beseitigen 1-2 Mäuse / Gruppe, weil sie aus der Aufhängevorrichtung zu kommen. Mit dem Weg-Ring-Verfahren gab es keine Fälle von Mäusen aus Versehen, die aus dem HU Gerät während der HU für 14 oder 28 Tage (n = 54 Mäuse). Abbildung 1. Änderungen des Körpergewichts (Mittelwert ± SD). Abkürzungen: CON: Gewicht tragenden Mäusen der Kontrollgruppe (n = 76); Pre-HU: alle Mäuse vor der HU (n = 54); HU14: Mäuse Hinterlauf für 14 Tage (n = 34) entladen; HU28: Mäuse Hinterlauf für unbelasteten 28 Tage (n = 20); REC: Hinterlauf entladen Mäuse dürfen Käfig für 3 Tage (n = 22) zu erholen. Keine signifikanten Unterschiede im Körpergewicht waren zwischen den Gruppen beobachtet. Abbildung 2. Soleus Muskelatrophie (Mittelwert ± SD). Abkürzungen: CON: Gewicht tragenden Mäusen der Kontrollgruppe (n = 76); HU14: Mäuse Hinterlauf für 14 Tage (n = 34) entladen; HU28: Mäuse Hinterlauf für 28 Tage (n = 20) entladen, und REC: Hinterlauf entladen Mäusen erlaubt zum Käfig für 3 Tage (n = 22) zu erholen. * Signifikanter Unterschied (p <0,001) als tragende Kontrolle (CON). δSignificantly unterschiedlich (p <0,01) als die beiden HU Gruppen. 467fig3.jpg "alt =" Bild 3 "/> Abbildung 3. Verzehrsstudie (Mittelwert ± SD). Durchschnittliche tägliche Futteraufnahme (g / Tag) während Belastung und Hinterlauf Entladen. Abkürzungen: Gewicht tragenden Mäusen der Kontrollgruppe (n = 76); HU: Mäuse Hinterlauf unloaded14 – 28 Tage. Keine signifikanten Unterschiede zwischen den CON-und HU-Gruppen beobachtet. Abbildung 4. Adrenal Mass (Mittelwert ± SD). Abkürzungen: CON: Gewicht tragenden Mäusen der Kontrollgruppe (n = 76); HU14: Mäuse Hinterlauf für 14 Tage (n = 34) entladen; HU28: Mäuse Hinterlauf für 28 Tage (n = 20) entladen, und REC: Hinterlauf entladen Mäusen erlaubt zum Käfig für 3 Tage (n = 22) zu erholen. Wurden keine signifikanten Unterschiede zwischen den Gruppen beobachtet.