Espansione ex vivo di tumore cellule T reattive per mezzo di 1/Ionomycin Bryostatin e il Comune catena gamma Citochine Formulazione
Summary
Un protocollo efficiente per la<em> Ex vivo</emEspansione> di tumore cellule T reattive da tumore-drenante linfonodi o altri tessuti linfatici secondari del tumore-cuscinetto ospita è descritto. Questo protocollo si espande selettivamente tumore-specifiche cellule T per l'uso in immunoterapia adottiva di cancro al seno.
Abstract
E 'stato riferito che i pazienti con cancro al seno hanno una risposta immunitaria preesistente contro i 1,2 tumori. Tuttavia, tali risposte immunitarie non riescono a fornire protezione completa contro lo sviluppo o la recidiva di cancro al seno. Per superare questo problema aumentando la frequenza del tumore cellule T reattive, immunoterapia adottiva è stato impiegato. Una varietà di protocolli sono stati utilizzati per l'espansione del tumore-specifica delle cellule T. Questi protocolli, tuttavia, sono limitati per l'utilizzo del tumore ex vivo antigeni per l'attivazione di antigene-specifiche cellule T. Molto recentemente, comune citochine gamma catena quali IL-2, IL-7, IL-15 e IL-21 sono stati utilizzati da soli o in combinazione per il miglioramento della risposta immunitaria anti-tumorale 3. Tuttavia, non è chiaro quale formulazione avrebbe funzionato meglio per l'espansione del tumore cellule T reattive. Qui vi presentiamo un protocollo per l'attivazione selettiva e l'espansione delle cellule T tumorali-reattiva dal modello FVBN202 topo transgenico di carcinoma mammario HER-2/neu positivo per l'uso in terapia cellulare adottiva T di cancro al seno. Il protocollo prevede l'attivazione di cellule T con bryostatin-1/ionomycin (B / I) e di IL-2, in assenza di antigeni tumorali per 16 ore. B / I di attivazione imita segnali intracellulari che comportano l'attivazione delle cellule T, aumentando l'attività della proteina chinasi C e calcio intracellulare, rispettivamente 4. Questo protocollo attiva specificamente tumore-specifica delle cellule T, mentre l'uccisione delle cellule T irrilevante. Il B / I-cellule T attivate sono in coltura con IL-7 e IL-15 per 24 ore e poi pulsato con IL-2. Dopo 24 ore, le cellule T sono lavati, divisi, e la coltura con IL-7 + IL-15 per ulteriori 4 giorni. Tumorali specificità e l'efficacia anti-tumorale della ex vivo delle cellule T espanse è determinata.
Protocol
Discussion
Espansione selettiva del tumore-reattiva cellule T effettrici con funzione anti-tumorale può essere ottenuto utilizzando il protocollo proposto B / I di attivazione ed espansione ex vivo con citochine catena gamma di IL-2, IL-7 e IL-15. Mentre IL-2 è un fattore di crescita delle cellule T in grado di supportare la differenziazione e l'espansione di antigene-specifiche cellule T, IL-7 in grado di inibire l'apoptosi delle cellule T e sostenere la loro vitalità durante l'espansione. IL-15 può suppo…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto da NIH R01 CA104757 Grant (MH Manjili). Noi riconosciamo con gratitudine il sostegno della VCU Massey Cancer Center e della Fondazione del Commonwealth per la Ricerca sul Cancro.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bryostatin 1 | Sigma | B7431-10ug | ||
| Ionomycin | Calbiochem | 407950 | ||
| Mouse IL-7 | PeproTech | 217-17 | ||
| Mouse IL-15 | PeproTech | 210-15 | ||
| Human IL-2 | PeproTech | 200-02 | ||
| RPMI1640 | Invitrogen | 11875 | ||
| FBS | Gemini | 100-106 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Cellgro | 30-002-CI | ||
| L- glutamine | Invitrogen | 25030081 | ||
| β- mercaptoethanol | Sigma | M7522 | ||
| anti-CD16/32 antibody | Biolegend | 101302 | ||
| Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit | BD Pharmingen | 556547 | ||
| FITC-CD4 | Biolegend | 100406 | ||
| PE-CD8 | Biolegend | 100708 | ||
| anti-c-Erb2/c–Neu | Calbiochem | OP16 | ||
| PE- anti mouse IgG | Biolegend | 405307 | ||
| formaldehyde | Polysciences | 04018 | ||
| Hemocytometer | Hycor | 87144 | ||
| Light microscope | VWR | V200073 | ||
| Mouse IFN-γ ELISA set | BD Pharmingen | 555138 | ||
| Cell culture flasks | Greiner | 658175 |
References
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