بروتوكول للكفاءة<em> خارج الحي</emيوصف> التوسع في ورم الخلايا التائية التفاعل من ورم الغدد الليمفاوية تجفيف أو غيرها من الأنسجة اللمفاوية الثانوية الحاملة للورم المضيفين. يوسع هذا البروتوكول بشكل انتقائي خلايا T للورم محددة لاستخدامها في العلاج المناعي بالتبني من سرطان الثدي.
أفادت الأنباء أن مرضى سرطان الثدي قد موجودة مسبقا الاستجابات المناعية ضد الأورام 1،2 بهم. ومع ذلك ، فشلت هذه الاستجابات المناعية لتوفير الحماية الكاملة ضد تطوير أو تكرار الاصابة بسرطان الثدي. للتغلب على هذه المشكلة عن طريق زيادة وتيرة ورم الخلايا التائية التفاعل ، واستخدمت العلاج المناعي بالتبني. وقد استخدمت مجموعة متنوعة من البروتوكولات لتوسيع خلايا الورم T – معينة. هذه البروتوكولات ، ومع ذلك ، وتقتصر على استخدام المضادات الورم فيفو السابقين لتنشيط خلايا T مستضد محدد. قريب جدا ، وقد استخدمت المشتركة السيتوكينات سلسلة غاما مثل IL – 21 IL – 2 ، IL – 7 ، IL – 15 ، وحدها أو في تركيبة من أجل تعزيز مكافحة الورم الاستجابات المناعية 3. ومع ذلك ، فإنه ليس واضحا ما سيعمل أفضل صياغة لتوسيع خلايا الورم T التفاعل. هنا نقدم بروتوكولا لتفعيل انتقائية وتوسيع التفاعل ورم الخلايا التائية من نموذج FVBN202 الماوس المعدلة وراثيا من سرطان الثدي HER-2/neu إيجابية للاستخدام في علاج الخلايا T بالتبني من سرطان الثدي. البروتوكول يتضمن تنشيط خلايا T مع bryostatin-1/ionomycin (B / I) و IL – 2 في غياب مستضدات الورم لمدة 16 ساعة. B / I التنشيط يقلد الاشارات بين الخلايا التي تؤدي إلى تنشيط الخلايا T عن طريق زيادة نشاط البروتين كيناز سي والكالسيوم داخل الخلايا ، على التوالي 4. هذا البروتوكول على وجه التحديد ينشط الخلايا T – ورم معين في حين قتل خلايا T لا صلة لها بالموضوع. يتم تربيتها في B / I – تنشيط خلايا T مع IL – 7 و IL – 15 لمدة 24 ساعة وبعد ذلك مع نابض IL – 2. بعد 24 ساعة ، ويتم غسل الخلايا التائية ، تقسيم ، والمثقف مع IL – 7 + IL – 15 ليوم 4 إضافية. يتم تحديد فعالية وخصوصية للورم المضادة للورم في خلايا الجسم الحي السابقين T الموسعة.
ويمكن تحقيق التوسع الانتقائي للورم خلايا تي التفاعل مع وظيفة مضادة للورم المستجيب من البروتوكول المقترح باستخدام B / I التنشيط وبحكم التوسع المجراة مع السيتوكينات سلسلة غاما IL – 2 ، IL – 7 و IL – 15. بينما IL – 2 هو عامل نمو الخلايا التائية التي يمكن أن تدعم التمايز وا?…
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة CA104757 المنحة R01 (MH Manjili). نحن نعترف بامتنان دعم مركز سرطان سي يو ماسي ومؤسسة الكومنولث للبحوث السرطان.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Bryostatin 1 | Sigma | B7431-10ug | ||
Ionomycin | Calbiochem | 407950 | ||
Mouse IL-7 | PeproTech | 217-17 | ||
Mouse IL-15 | PeproTech | 210-15 | ||
Human IL-2 | PeproTech | 200-02 | ||
RPMI1640 | Invitrogen | 11875 | ||
FBS | Gemini | 100-106 | ||
Penicillin/Streptomycin | Cellgro | 30-002-CI | ||
L- glutamine | Invitrogen | 25030081 | ||
β- mercaptoethanol | Sigma | M7522 | ||
anti-CD16/32 antibody | Biolegend | 101302 | ||
Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit | BD Pharmingen | 556547 | ||
FITC-CD4 | Biolegend | 100406 | ||
PE-CD8 | Biolegend | 100708 | ||
anti-c-Erb2/c–Neu | Calbiochem | OP16 | ||
PE- anti mouse IgG | Biolegend | 405307 | ||
formaldehyde | Polysciences | 04018 | ||
Hemocytometer | Hycor | 87144 | ||
Light microscope | VWR | V200073 | ||
Mouse IFN-γ ELISA set | BD Pharmingen | 555138 | ||
Cell culture flasks | Greiner | 658175 |