哺乳類の中枢神経系における視神経切断後の実験操作のための方法
Summary
視神経切断は、成体中枢神経系の損傷の広く使用されているモデルです。このモデルは、世界的に網膜をターゲットにするか、直接網膜神経節細胞の損傷した神経細胞集団を対象に実験操作の数を実行するための理想的です。
Abstract
網膜神経節細胞は（RGCs）視神経を経由して、網膜から脳にその出力を視覚情報CNSニューロンです。視神経は、全体RGC人口の軸索を切断、目と完全にtransected（axotomized）の軌道内でアクセスすることができます。視神経切断は、成体中枢神経系1-4のアポトーシス神経細胞死の再現可能なモデルです。眼の硝子体腔は眼内注射を介して実験操作を可能にして、網膜への薬物送達のためのカプセルとして機能するので、このモデルは特に魅力的です。硝子体液を介して化学物質の拡散は、彼らが全体のRGCの人口に基づいて行動することを保証します。ウイルスベクター、プラスミドまたは短い干渉RNAは（siRNAが）も5-12を網膜細胞に感染またはトランスフェクトするために硝子体腔に配信することができます。アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターの高い親和性は、注射部位6、7、13-15近くの細胞の90％に近い感染率で、ターゲットRGCsに有益です。また、RGCsが選択的に標的上丘10に視神経16から19または注入ベクトルの切り口にしたsiRNA、プラスミド、またはウイルスベクターを適用することにより、トランスフェクションすることができる。これは、研究者は他のバイスタンダーの神経細胞または周囲のグリア細胞上で交絡の影響なしに負傷した神経細胞集団のアポトーシスのメカニズムを研究することができます。 RGCのアポトーシスは、細胞死、細胞が急速に退化した後、3〜4日のpostaxotomyを遅延さにより時間経過特性を持っています。これは、アポトーシスに関与する経路に対して誘導実験操作のためのウィンドウが用意されています。直接transected視神経の切り株からRGCsをターゲットの操作はすぐに神経を切断した後、軸索切断時に実行されます。これとは対照的に、物質が眼内経路を介して配信されるとき、それらはaxotomized RGCsのアポトーシスの開始の前に、手術前または手術後3日以内に注入することができる。現在の記事では、視神経切断後の実験操作にはいくつかの方法を示しています。
Protocol
1。手術手技実験は無菌操作を使用して、特定の機関の動物使用のプロトコールに従って実施されるべきである。生体組織と接触する楽器と材料（ソリューション、テスト物質、トレーサー、針、など）動物福祉と研究上の潜在的な負の影響に感染して悪影響を防ぐために無菌でなければならない。 2。麻酔ラットは、獣医イソフルラン気化器のシス?…
Discussion
視神経切断は、成体中枢神経系ニューロンのアポトーシスの高度に再現可能なモデルです。この原稿で実証実験操作は、損傷後のRGCアポトーシスのメカニズムの研究を可能にする。
眼内注射は、網膜の全世界をターゲットするのに便利です。それはガラスピペットの先端にレンズを傷つけないよう重要であるとして、この手順では、いくつかの練習が必要です。レンズ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
PDKは、CIHRオペレーティング助成金（MOP 86523）によってサポートされています
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereotaxic Frame | Stoelting, Kopf, WPI | |||
| Rat Gas Mask | Stoelting, Kopf, WPI | |||
| Anesthesia System | VetEquip | 901806 | ||
| Isoflurane (PrAErrane) | Baxter Corp | DIN 02225875 | ||
| Surgical Microscope | WPI, Zeiss, Leica | |||
| Alcaine Eye Drops | Alcon | |||
| Tears Naturale P.M. | Alcon | |||
| Fine tip Dumont forceps | Fine Science Tools | 11252-00 | ||
| 10 μl Hamilton Syringe (1701RN; 26s/2”/2) | Hamilton Syringe Co. | 80030 | ||
| 1/16 inch Compression Fittings | Hamilton Syringe Co. | 55751-01 | ||
| 1/16 inch OD, 0.010 inch ID, PEEK Tubing | Supelco, Bellefonte, PA | Z226661 | ||
| Dual RN Glass Coupler | Hamilton Syringe Co. | 55752-01 | ||
| Mineral Oil Priming Kit: includes syringe, needles, rubber septa | Hamilton Syringe Co. | PRMKIT |
References
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Tags
Optic Nerve TransectionExperimental ManipulationsMammalian CNSRetinal Ganglion CellsOptic NerveAxotomizedApoptotic Neuronal Cell DeathVitreous ChamberDrug DeliveryIntraocular InjectionsViral VectorsPlasmidsSiRNAsAdeno-Associated Virus (AAV) VectorsRGCs TargetingSuperior ColliculusApoptotic Mechanisms
Cite This Article
D’Onofrio, P. M., Magharious, M. M., Koeberle, P. D. Methods for Experimental Manipulations after Optic Nerve Transection in the Mammalian CNS. J. Vis. Exp. (51), e2261, doi:10.3791/2261 (2011).