Summary

Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon Fare Hipofiz İmmunogen hazırlanması

Published: December 17, 2010
doi:

Summary

Otoimmün hipofizitis fare hipofiz proteinlerin bir özü enjekte farelerde çoğaltılabilir.

Abstract

Otoimmün hipofizitis otoimmünite 1 neden olduğu ya da eşlik hipofiz bezinin kronik iltihabıdır. Geleneksel olarak, nadir görülen bir hastalık kabul edilmiştir, ancak raporlama son yıllarda önemli ölçüde arttı. Hipofizitis, aslında, T lenfositleri, CTLA-4 2 ve PD-1 reseptör olarak ifade inhibitör reseptörlerini bloke eden antikorlar ile tedavi edilen kanser hastalarında bir "yan etkisi" olarak seyrek değil geliştirir. Otoimmün hipofizitis bir adjuvan 3 ile karışık hipofiz proteinleri ile farelere enjekte edilerek deneysel olabilir. Bu video makalede fare hipofiz bezi ve nasıl SJL farelerde otoimmün hipofizitis inducing için uygun bir form hazırlamak için protein ayıklamak için nasıl göstermektedir.

Protocol

Deneysel Protokolü Bu deney protokolünde ilk adım fare hipofiz bezi çok sayıda toplamak için. İkinci adım, bir protein elde etmek için bezleri homojenize. Üçüncü adım, yağlı bir karışım olan bu proteinler emülsifiye. Adım 1: fare hipofiz bezi toplanması ve depolanması Fare hipofiz bezi, optik kiazma trigeminal sinirler ve anteriora yanal çevrili sfenoid kemiğin sella tursika denilen bir depresyon, kafatasının di…

Discussion

1962 4 otoimmün hipofizitis ile ilk hasta rapor olmasına rağmen, patojen hipofiz otoantijenler 5 tanımlanabilir kalır. Hayvan modelleri, hasta bakımı çevrilebilir biyobelirteç keşif yardım, bu otoantijenler tanımlamak için çok yararlı olabilir. Bu makale, deneysel hayvanlarda otoimmün hipofizitis inducing için yeterli bir form hipofiz proteinler hazırlamak için basit bir işlemdir göstermiştir.

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu çalışma PC NIH hibe DK080351 tarafından desteklenmiştir.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
15-ml Falcon tubes        
homogenization buffer        
phosphate buffered saline        
protease inhibitor cocktail        
Polytron homogenizer        
BCA assay   Pierce 23225  
Complete Freund’s Adjuvant (CFA)   Sigma F-5881  
Mycobacterium tuberculosis   Becton Dickinson 231141  
2.5 mL Hamilton gastight syringe        
22-gauge micro-emulsifying needle        

References

  1. Caturegli, P., Newschaffer, C., Olivi, A., Pomper, M. G., Burger, P. C., Rose, N. R. . Autoimmune Hypophysitis Endocr Rev. 26, 599-614 (2005).
  2. Blansfield, J. A., Beck, K. E., Tran, K., Yang, J. C., Hughes, M. S., Kammula, U. S., Royal, R. E., Topalian, S. L., Haworth, L. R., Levy, C., Rosenberg, S. A., Sherry, R. M. Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 blockage can induce autoimmune hypophysitis in patients with metastatic melanoma and renal cancer. J Immunother. 28, 593-598 (2005).
  3. Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model. Endocrinology. 149, 3461-3469 (2008).
  4. Goudie, R. B., Pinkerton, P. H. Anterior hypophysitis and Hashimoto’s disease in a woman. J Pathol Bacteriol. 83, 584-585 (1962).
  5. Caturegli, P. Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s). J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).

Play Video

Cite This Article
Tzou, S., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis. J. Vis. Exp. (46), e2181, doi:10.3791/2181 (2010).

View Video