Summary

Preparazione di Immunogeno mouse ipofisari per l'induzione di ipofisite autoimmune sperimentale

Published: December 17, 2010
doi:

Summary

Ipofisite autoimmune può essere riprodotta nei topi iniettando un estratto di proteine ​​del mouse pituitaria.

Abstract

Ipofisite autoimmune è una infiammazione cronica della ghiandola pituitaria causata o accompagnati da autoimmunità 1. E 'stata tradizionalmente considerata una malattia rara ma segnalazione è aumentato notevolmente negli ultimi anni. Ipofisite, infatti, non si sviluppa raramente come un "effetto collaterale" nei pazienti con tumore trattati con anticorpi che bloccano i recettori inibitori espressi sui linfociti T, come CTLA-4 2 e PD-1 recettori. Ipofisite autoimmune può essere indotta sperimentalmente iniettando nei topi con le proteine ​​pituitaria mescolato con un adiuvante 3. In questo articolo video che dimostrano come estrarre proteine ​​dal topo ghiandola pituitaria e su come prepararli in una forma adatta per indurre ipofisite autoimmune in topi SJL.

Protocol

Protocollo sperimentale Il primo passo in questo protocollo sperimentale è quello di raccogliere un gran numero di topo ghiandola pituitaria. Il secondo passo è quello di omogeneizzare le ghiandole a preparare un estratto di proteine. Il terzo passo è quello di emulsionare queste proteine ​​con una miscela di idrocarburi. Fase 1: Raccolta e conservazione di mouse ghiandola pituitaria La ghiandola pituitaria del mouse si trova alla …

Discussion

Nonostante il fatto che il primo paziente con ipofisite autoimmune è stato segnalato nel 1962 4, l'ipofisi autoantigeni patogeni devono essere ancora identificate 5. I modelli animali possono essere molto utili per identificare questi autoantigeni, favorendo la scoperta di biomarcatori che sono traducibili alla cura del paziente. Questo articolo ha dimostrato una procedura semplice per la preparazione di proteine ​​pituitaria in una forma che è sufficiente per indurre ipofisite autoimmuni…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato sostenuto da NIH concedere DK080351 al PC.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
15-ml Falcon tubes        
homogenization buffer        
phosphate buffered saline        
protease inhibitor cocktail        
Polytron homogenizer        
BCA assay   Pierce 23225  
Complete Freund’s Adjuvant (CFA)   Sigma F-5881  
Mycobacterium tuberculosis   Becton Dickinson 231141  
2.5 mL Hamilton gastight syringe        
22-gauge micro-emulsifying needle        

References

  1. Caturegli, P., Newschaffer, C., Olivi, A., Pomper, M. G., Burger, P. C., Rose, N. R. . Autoimmune Hypophysitis Endocr Rev. 26, 599-614 (2005).
  2. Blansfield, J. A., Beck, K. E., Tran, K., Yang, J. C., Hughes, M. S., Kammula, U. S., Royal, R. E., Topalian, S. L., Haworth, L. R., Levy, C., Rosenberg, S. A., Sherry, R. M. Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 blockage can induce autoimmune hypophysitis in patients with metastatic melanoma and renal cancer. J Immunother. 28, 593-598 (2005).
  3. Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model. Endocrinology. 149, 3461-3469 (2008).
  4. Goudie, R. B., Pinkerton, P. H. Anterior hypophysitis and Hashimoto’s disease in a woman. J Pathol Bacteriol. 83, 584-585 (1962).
  5. Caturegli, P. Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s). J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).

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Cite This Article
Tzou, S., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis. J. Vis. Exp. (46), e2181, doi:10.3791/2181 (2010).

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