腹腔注射到成年斑马鱼

1。注射前准备工作快速的鱼至少24小时前注射。这将空肠道灯泡（胃）的内容。基本空腹协议转让的鱼，在他们的正常密度，一个干净的坦克，然后扣的食物。对于较长期的空腹，需要更严格的条件下（如血糖研究），看到讨论的其他因素。 准备盐溶液科特兰（Perry 等 ，1984）。 对于一个100毫升的量，溶于蒸馏水中以下内容： 725毫克盐（124.1毫米） 38毫克氯化钾（5.1毫米） 41毫克钠2 HPO 4（2.9毫米） 24毫克硫酸镁4∙7H 2 O（1.9毫米） 16毫克氯化钙2∙2H 2 O（1.4毫米） 100毫克碳酸氢钠3（11.9毫米） 4克聚乙烯吡咯烷酮（PVP）（4％） 千药典单位肝素过滤，消毒，并保存在4 ° C。 准备在显微镜。 盖保鲜膜在泄漏的情况下保护显微镜的基础。 把保鲜膜的顶部纸巾。坐在纸巾上手术台。 预调整的重点，通过观看手术表，并专注于海绵。 提示：把海绵上你的手指，并侧重于。这将进一步消除或减少焦距调整一次上手术台的鱼。 称取鱼。 填写一个500 mL烧杯中约1 / 3充满鱼设施水。 皮的平衡。 使用网收集的鱼。威克多余的水远离简单地涂抹在纸巾上的净净鱼。鱼转移到烧杯中。 称取鱼。 鱼转移到一个干净的坦克。 每个重达鱼转移到自己的标记坦克。 计算的注射量为鱼体重的每条鱼。 准备的注射器和相关的注射设备。注射用，我们建议一个35G斜角钢针和10μLNanoFil microsyringe。准备NanoFil注射器制造商的指示和silflex油管。重要的是要删除任何气泡从注射器和管。灌装注射器和油管后，装入注射器泵上的，并计划第一条鱼的注射量。 准备手术的表。 切柔软的海绵（如＃L800 – D Jaece工业），因此，它是在高度约20毫米。在平坦的脸，作出削减10-15毫米深。这种切割是注射的鱼槽，将举行。 设置成60毫米培养皿的海绵。 设置成一个适当大小的枪头箱盖海绵的培养皿。盖子必须大到足以容纳的水，以帮助保持海绵温度，但它应该是足够浅的方式获得。我们使用从P200的提示框是11.4厘米长x 7.7厘米宽x 1.5厘米的盖子D. 这三个项目组装在一起（在培养皿中盘箱盖海绵）构成的手术台。 准备麻醉剂。 请使用鱼设施水制成的多维数据集的碎冰。 提示：使用典型的冰块托盘，将采取3盘麻醉10-12鱼。 碎冰填充清洁冰桶。 放入一个更大的容器，如一个2.4升Rubbermaid的食物储存容器的手术台。 倒入一些设施水（温）外部容器和手术台。附近保持温暖设施，水的储备。 外部容器放入一个温度计。 2。麻醉，注射和恢复将麻醉的外层容器加手术台旁显微镜。有冰块的桶附近。 把水的温度下降到17℃加入冰块。重要提示：不要低于17 ° C这一步。 使用净鱼转移到外部容器。 慢慢加入冰块的容器，把温度降低到12℃，超过几分钟的过程中。 监视器鱼的行为：在17 ° C或略低，鱼通常会传播其胸鳍水平，全球航空安全计划，并具有快速的鳃盖运动。随着气温下降，鱼会游泳更慢，最后停止游泳。由于手术的麻醉平面接触，喘气将停止，鳃盖运动将放缓。这种鱼是准备注射时没有反应处理。对于大多数鱼，12 ° C就足够了。更大的鱼可能需要更冷的WA之三。 由于所需的温度达到饱和的海绵（〜12 ° C或更低），按。 保持你的手指在冷水足以使他们不会热身鱼和带来的麻醉处理过程中。 用冷的手指，轻轻的鱼转移到槽的海绵。腹部和槽鳃鱼的位置。 快速传输的手术台，在显微镜阶段。 工作迅速，小心地插入针腹鳍之间的中线。针指向颅插入肛门比接近骨盆带。你应该能感觉到，当针深体壁。注入适当的数量和撤出针。 注射后，立即将鱼放回温水（〜28.5℃）回收罐释放出的鱼在鱼缸水的海绵。 提示：如果鱼没有立即开始游泳，帮助它恢复对鳃的水轻轻摇动。 检查针。偶尔可连接规模和未来注射前应删除。 对于随后的注射，用温水设施水，使麻醉室水温高达17℃前引入未来的鱼。 3。代表性的成果： 图1。代表性的结果，下面的腹腔注射0.5毫克/克葡萄糖或车辆。注射前72小时禁食鱼。 X轴显示时间，注射后。平均± SEM。