الشفوي إدارة روتنون باستخدام بالتزقيم وتحليل صورة الفا synuclein الادراج في الجهاز العصبي المعوي
Summary
وقد ارتبط مرض باركنسون إلى التعرض للمبيدات الحشرية. هنا نعرض طريقة لتقديم المبيدات الحشرية باستخدام أنبوب إلى المعدة في التركيز المطلوب وطريقة لتحليل أثرها في تراكم synuclein ألفا في الجهاز العصبي المعوي.
Abstract
في مرضى باركنسون (PD) المرض ، وعلم الأمراض المرتبطة يتبع نمطا مميزة تشمل في جملة أمور على الجهاز العصبي المعوي (ENS) 1،2 ، والبصلة الشمية (OB) ، النواة الحركية الظهرية من 3 (DMV) المبهم ، والمتوسطي 4 نواة الحبل الشوكي ، والمادة السوداء ، وتوفير الأساس لانطلاق neuropathological من المرض 4،5. وENS وOB هم الأكثر تعرضا للهياكل العصبي ومنها أول من يتأثر. ومن المثير للاهتمام ، وقد ارتبط التعرض للمبيدات لPD 6-8. هنا نعرض بالتفصيل طريقتين المستخدمة في دراستنا السابقة 9. من أجل تحليل آثار روتينون تعمل محليا على ENS ، ونحن يديرها روتينون باستخدام أنبوب تغذية لمدة عام واحد الفئران C57/BL6 القديمة. روتينون هو المبيدات المستخدمة على نطاق واسع أن يكبح بقوة مجمع الميتوكوندريا أنا 10. فمن lipophylic للغاية ، واستوعبت ضعيفا في الجهاز الهضمي 11. وأظهرت نتائجنا ان الادارة من 5 ملغم / كغم من روتينون لم تمنع مجمع الميتوكوندريا أنا النشاط في العضلات أو الدماغ. وهكذا ، مما يشير إلى أن استخدام أسلوب الإدارة لدينا روتينون لم يعبر النظام كبدي بوابي وكان يتصرف فقط على ENS. هنا نعرض طريقة لإدارة مبيدات الآفات باستخدام بالتزقيم وبروتوكول تحليل الصور المستخدمة لتحليل آثار المبيدات في تراكم synuclein ألفا في ENS. الجزء الأول يوضح طريقة تسمح إدارة المبيدات داخل المعدة (روتينون) في تركيز دقيق المطلوب. الأسلوب الثاني يظهر تحليل الصور شبه التلقائي لتحليل بروتوكول ألفا synuclein تراكم في ENS باستخدام برمجيات تحليل الصور.
Protocol
Discussion
وقد تم داخل المعدة الادارة تؤديها سابقا 12. ومع ذلك ، وفقا لمخطوطة Inden ، وكانت تدار روتينون المذابة في 0.5 ٪ كربوكسي ميثيل سلولوز ملح الصوديوم (نظم إدارة المحتوى) وحدها. روتينون هو مادة عالية liphophylic. لذا ، لا يمكن أن يتم حله في روتينون نظم إدارة المحتوى وحدها 0.5 ٪ ، وس?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
دعمت باري بيدرو دي لا مازا المؤسسة هذا العمل.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Rotenone | SIGMA-Aldrich | R8875 | Germany | |
| Chloroform | Carl Roth | 3313.1 | Germany | |
| Carboxymethylcellulose | SIGMA-Aldrich | C5678 | Germany | |
| Gavage 1,2 mm x 60 mm | Unimed | Switzerland | ||
| LSM 510 | Zeiss Microscopes | |||
| FIJI | http://pacific.mpi-cbg.de |
References
- Braak, H., de Vos, R. A., Bohl, J., Del Tredici, K., K, . Gastric alpha-synuclein immunoreactive inclusions in Meissner’s and Auerbach’s plexuses in cases staged for Parkinson’s disease-related brain pathology. Neurosci Lett. 396, 67-72 (2006).
- Wakabayashi, K., Takahashi, H., Ohama, E., Ikuta, F. Parkinson’s disease: an immunohistochemical study of Lewy body-containing neurons in the enteric nervous system. Acta Neuropathol. 79, 581-583 (1990).
- Wakabayashi, K. Restricted occurrence of Lewy bodies in the dorsal vagal nucleus in a patient with late-onset parkinsonism. J Neurol Sci. 165, 188-191 (1999).
- Braak, H., Sastre, M., Bohl, J. R., de Vos, R. A., Del Tredici, K. Parkinson’s disease: lesions in dorsal horn layer I, involvement of parasympathetic and sympathetic pre- and postganglionic neurons. Acta Neuropathol. 113, 421-429 (2007).
- Braak, H., Ghebremedhin, E., Rub, U., Bratzke, H., Del Tredici, K. Stages in the development of Parkinson’s disease-related pathology. Cell Tissue Res. 318, 121-134 (2004).
- Gorell, J. M., Johnson, C. C., Rybicki, B. A., Peterson, E. L., Richardson, R. J. The risk of Parkinson’s disease with exposure to pesticides, farming, well water, and rural living. Neurology. 50, 1346-1350 (1998).
- Semchuk, K. M., Love, E. J., Lee, R. G. Parkinson’s disease and exposure to agricultural work and pesticide chemicals. Neurology. 42, 1328-1335 (1992).
- Butterfield, P. G., Valanis, B. G., Spencer, P. S., Lindeman, C. A., Nutt, J. G. Environmental antecedents of young-onset Parkinson’s disease. Neurology. 43, 1150-1158 (1993).
- Pan-Montojo, F. Progression of Parkinson’s disease pathology is reproduced by intragastric administration of rotenone in mice. PLoS One. 5, e8762-e8762 (2010).
- Sherer, T. B. Mechanism of toxicity in rotenone models of Parkinson’s disease. J Neurosci. 23, 10756-10764 (2003).
- Bove, J., Prou, D., Perier, C., Przedborski, S. Toxin-induced models of Parkinson’s disease. NeuroRx. 2, 484-494 (2005).
- Inden, M. Neurodegeneration of mouse nigrostriatal dopaminergic system induced by repeated oral administration of rotenone is prevented by 4-phenylbutyrate, a chemical chaperone. J Neurochem. 101, 1491-1504 (2007).
