Studio gliali eterogeneità Influenza sulla crescita cellulare Axon Utilizzando un nuovo metodo co-coltura
Summary
In questo protocollo, abbiamo descritto un nuovo metodo per studiare l'influenza delle eterogeneità delle cellule gliali sulla crescita degli assoni con un<em> In vitro</em> Di co-cultura di sistema. Rat cellule corticali gliali sono state coltivate a confluenza e cocultured con altamente purificato topo neuroni dei gangli dorsali. Diversi influenza delle cellule gliali sull'adesione neuroni e la crescita degli assoni è stato confrontato direttamente nella stessa cultura. Questo metodo fornisce un nuovo modo di studiare direttamente la eterogeneità delle cellule gliali influenza sulla adesione dei neuroni e la crescita degli assoni.
Abstract
Nel sistema nervoso centrale di tutti i mammiferi, gli assoni interrotto dopo l'infortunio non sono in grado di rigenerare i propri obiettivi di originale e di recupero funzionale è molto povera 1. Il fallimento della rigenerazione assonale è il risultato combinato di diversi fattori tra cui l'ambiente ostile di cellule gliali, inibitori delle molecole legate mielina dei neuroni e una diminuzione intrinseca capacità rigenerativa 2. Astrociti sono il tipo più predominante delle cellule gliali nel sistema nervoso centrale e svolgono un ruolo importante nelle funzioni dell'assone in fisiologia e le condizioni di patologia 3. Contrasto con l'omologo oligodendrociti, gli astrociti sono una popolazione cellulare eterogenea composta da diverse sottopopolazioni astrociti con morfologie diverse e l'espressione genica 4. Il significato funzionale di questa eterogeneità, come ad esempio le loro influenze sulla crescita degli assoni, è in gran parte sconosciuto.
Per studiare le cellule gliali, in particolare la funzione di eterogeneità astrociti nel comportamento dei neuroni, abbiamo stabilito un nuovo metodo di co-colture di neuroni alta radice purificata gangli dorsali con le cellule gliali ottenuto dalla corteccia di ratto. Con questa tecnica, siamo stati in grado di confrontare direttamente l'adesione e la crescita degli assoni dei neuroni in diverse sottopopolazioni astrociti nelle stesse condizioni.
In questo rapporto, diamo il protocollo dettagliato di questo metodo per l'isolamento astrociti e la cultura, i neuroni dei gangli dorsali isolamento e la purificazione, e la co-coltura di neuroni DRG con astrociti. Questo metodo potrebbe essere esteso anche ad altre regioni del cervello per studiare cellulare o regionali specifici di interazione tra i neuroni e cellule gliali.
Protocol
Discussion
Questo protocollo esperimento è stato progettato per raggiungere due obiettivi per studiare le cellule gliali, l'influenza di eterogeneità soprattutto astrociti sulla adesione dei neuroni e la crescita dei neuriti. Il primo obiettivo era quello di mantenere l'eterogeneità astrociti il più possibile, in questo esperimento, la confluenza delle cellule gliali cultura astrociti arricchito è stato mixato cultura primaria senza alcun trattamento chimico e la propagazione digestione, che possono ulteriorment…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo studio è stato supportato da nuovi FMMU trovando fondazione e in parte fondi NIH.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM(high glucose) | Invitrogen | 10313-039 | ||
| L15 medium | Invitrogen | 11415-114 | ||
| FBS | Invitrogen | 10437-077 | ||
| Neurobasal Medium | Invitrogen | 21103-049 | ||
| poly-lysine | Sigma | P4832 | culture grade | |
| NGF(2.5S) | Invitrogen | 13257-019 | ||
| B27 supplyment | Invitrogen | 17504-044 | ||
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | ||
| FUDR | Sigma | F0503 | ||
| neurofilament antibody | Abcam | ab24575 |
References
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