נפח קבוע או לחץ קבוע: מודל Murine של הלם Hemorrhagic

1. כלי ההכנה שדה כירורגי: 1. כלי הכנה. כל הנהלים כירורגית מבוצעים תוך שימוש בטכניקות aseptic. פנקס כחול כירורגית בתחום ההלבשה סטרילי משמשים. כל החומרים והכלים הם מעוקרים לפני השימוש. 6-0 תפר, טיפ applicators כותנה, גאזה, בין גברים 3-way והברזים למיניהם, הם מכשירים מעוקרות החיטוי. מתמרים, PE-50, ו-PE-10 צינורות הם עיקור אתילן אוקסיד. 3-way כל והברזים למיניהם, מזרקים ומחטים מתקבלות סטרילית. 6-0 תפר הוא חתך לתוך 1-inch חתיכות (6 חתיכות / בעלי חיים) והכניסו שקיות עיקור קטן. כותנה-טיפ applicators, ריבועים 4×4 גזה, ו בין גברים 3-way והברזים למיניהם הם הכניסו לתוך שקיות או קטן או בינוני עיקור בגודל autoclaved. מכשירי ניתוח עיקור החיטוי שלנו בכל ערב. הם נשטפים לאחר הניתוח באמצעות סבון אנטיבקטריאלי מי ברז. הם להתייבש על משטח נקי כחול כירורגית. הם ואז הניח בזהירות לתוך כיס העיקור עיקור לשימוש למחרת היום. מאז מתמרים צינורות יש רכיבי פלסטיק, הם חייבים להיות מעוקר באמצעות גז אתילן אוקסיד כלומר. PE-10 צינורות הוא חתך לתוך 5 אינץ' חתיכות להציב לתוך שקיק קטן עיקור. PE-50 הוא חתך לתוך צינורות 18 אינץ' חתיכות להציב לתוך כיס עיקור בינוני. 2. ניתוח שדה. כדי הגדרת את השדה כירורגית, ראשית, להפעיל את מעקר את החרוז חם, כדי להבטיח שהוא מגיע לטמפרטורה המתאימה 300-350 F ° לפני תחילת הניתוחים. ואז להמשיך את הצעדים הבאים על ידי הנחת כריות כחולות כירורגית על אלכוהול מחה benchtop. כרית אחת מתחת למיקרוסקופ הולך והשני ממשיך כרית חימום במחזור שבו מנתחי BP נמצאים. המקום שדה סטרילי הרוטב על שתי כריות כחולות כירורגית. מלא נירוסטה מכשיר מגש 1 / 3 של הדרך עם 70% אלכוהול. השתמש מספיק EtOH 70% כדי לכסות את כל מכשירי ניתוח. השתמש הלבשה נפרד בשדה סטרילי ולמקם אותו ליד המיקרוסקופ. שמים את כל המכשירים עקרים, תפר, גזה, צנתרים על השדה הזה סטרילי. היזהר בעת פתיחת מכשירים סטרילית תפר שלא לזהם אותם על ידי נגיעה בהם. מומלץ להשתמש בכפפות סטריליות בעת ביצוע פעולה זו הליך ההתקנה. 2. מכונות הקמה ונהלים: 1. צנתר הגדרת. כדי הגדרת את הקטטר רגל ימין Murine למדידת BP, הראשון, ללבוש כפפות סטריליות. ואז לקבל את סטרילית PE-10 צינורות מתוך הכיס autoclaved. תפוס את אמצע הצינור מצביע עם האצבע והאגודל עוזב על סנטימטר ביניהם. למתוח את החלק הזה של הצינור קצת כדי לעשות את זה מדלל בקוטר לעזור עם החדרת קטטר. אחרי מתיחת צינורות לחתוך אותו לשניים באמצעות מספריים סטרילית. צינורות 5 אינץ' כעת אמור להיות שתי חתיכות כ ½ 2 אינץ 'אורך. הקפד שפוע סוף נמתח. * אין זווית קצה משופעים יותר מדי כמו זה יכול להגדיל את הסיכוי ליציאה לומן על ידי חדירה דרך התחתון של הקיר כלי. הכנס מחט 30G לתוך סוף unstretched הבוטה של ​​צינורות. קבל מזרק 1cc סטרילית שסתום 3-way. שימוש באלכוהול לנגב לעקר את החלק העליון של הבקבוקון סטרילי 10cc המכיל את תמיסת מלח heparinized (0.1ml Heparin/9.9ml מלוחים). מלאו את המזרק עם 0.6-0.7cc של הפתרון הפרין. צרף את המחט 30G ו קטטר לסוף הדרך-3 כי הוא ישירות מול סוף זכר. מלאו את שסתום, מחט 30G ו PE-10 צינורות עם פתרון הפרין. הקפד לקבל את כל בועות האוויר מחוץ למערכת. הדרך היעילה ביותר להסיר את כל בועות האוויר היא להשתמש הכבידה. כוון את המחט לעבר הקרקע בעת נותנים להשתלשל צינורות כדי benchtop. תן הרכזת מחט קפיצי האצבעות ואת הבועות יצופו למעלה הפתרון הפרין. הסר את המחט 30G מהדרך-3 ו להסיר את הבועות. משיכה נוזל בחלק האחורי 3-בדרך לתוך מזרק 1cc כדי להסיר בועות, כי הם לכודים בצורה-3 ולחבר את צינור לאופן-3. כ 1cc של התערובת צריכה להישאר בתוך המזרק. עכבר יקבל על 0.05cc מתערובת זו (כתוצאה הסמקה את הקטטר כדי לשמור patency על ההכנסה) שווה בערך 1U הפרין / עכבר. המקום הזה קטטר השלימה למגרש סטרילי ההלבשה עם מכשירי ניתוח. כדי הגדרת את הקטטר רגל שמאל Murine בצע את ההליך כפי שתוארו לעיל למעט שסתום 3-הדרך. רגל שמאל משמשת כדי למשוך את הדם ואת שסתום 3-way אינו נדרש. מלאו אחר מזרק 1cc סטרילי עם 0.15-0.2cc של התערובת מלוחים heparinized. הוק את המחט 30G ו-PE-10 טוביng ישירות מזרק 1cc. מלאו את המערכת קטטר רגל שמאל עם פתרון. הסר את בועות ממערכת זו, יותר מדי. מניחים את הקטטר השלימה למגרש סטרילי ההלבשה עם מכשירים סטריליים. 2. מתמר הגדרת. Hook up מתמר סטרילי כדי מנתח digi-MED 400 BPA פי מיקרו מד מפרטים. צרף שסתום 3 דרך שני הקצוות של מתמר. ממלאים מזרק 10cc עם פתרון Ringer Lactated (LR) וצרף אותו דרך-3, כך יהיה מתמר לשכב על benchtop. הכנס מחט 23G לתוך בשני הקצוות של פיסת שנחתך מראש פוזרו presterilized 18 אינץ PE-50 צינורות. חבר קצה אחד של צינור PE-50-3 לדרך עם מזרק 10cc המצורפת. מלאו את 3 כיוונים PE-50 הגדרת עם LR. הקפד לקבל את כל בועות האוויר מחוץ למערכת כמתואר בסעיף הקודם. חבר מחדש את 3-דרך מתמר ולמלא את מתמר ו 2 nd 3-way עם LR. לבסוף, לצרף את הזכר גברית מתכת Leur נעילת שסתום אל המחט 23G של צינורות PE-50 עבור הקובץ המצורף קטטר רגל ימין Murine. * זה קריטי, כי נוזל להישאר מתמר כאשר במבצע. * בצע כיול אפס הליכים על פי פרוטוקול Micro-med. 3. כירורגי ניסויית נהלים: 1. פרוצדורות כירורגיות. בגין על ידי מתן זריקה intraperitoneal של נתרן Pentobarbitol (Nembutol) (70mg/kg @ דילול 01:10). הליך זה נעשה על ידי, ראשית, לקטוף את העכבר למעלה מהכלוב שלה באמצעות הבסיס (הקצה הפרוקסימלי ביותר) של זנבו. בשלב הבא, המקום החיה על גבי הכלוב בעודו אוחז בזנבו. תפוס את הצוואר בעורפו של העכבר עם האגודל והאצבע האמצעית בכל צד של העכבר בדיוק מאחורי הרגליים הקדמיות. אצבע המדד משמש כדי למשוך את העור על אזור הראש / צוואר לעבר בעורפו כדי לשתק את הראש. הזנב של העכבר הוא עטוף אז והחזיק בין האצבע הקטנה ואת הקמיצה בעוד הקמיצה נלחץ לתוך האזור המותני של עמוד השדרה של העכבר. העכבר צריך להיות נרדם בתוך 5 דקות. אחרי החיה המקום הרדים אותם על צלחת המתכת כירורגית במצב שכיבה. הטכניקה רופף הקלטת לולאה משמש כדי לשתק את בעלי החיים על ידי מקליטה הגפיים שלהם. הטכניקה כרוכה לולאה רופפת פשוט לחתוך רצועות דקות של קלטת מעטף את הקלטת באופן רופף סביב כל הגפיים קדמי נחות כפה וסביב כל אחד הגפיים האחוריות נחות הכף. הקלטת תקוע ואז חזרה על עצמה ועל שמאל על קלטת מחוברת ללוח. זה מאפשר את הגפיים של העכברים להניח עמדה אנטומית טבעית יותר. אזורי הבטן מפשעתי של החיה הם גילחו מכן באמצעות אוסטר גודל A5 קוצץ 40 להב. גזה 4×4 הוא שפך בבטאדין ואזור הניתוח הוא מחה אז על סטריליות. לאחר immobilization ועיקור, חרוט האף עם 1cc של isoflurane ממוקם מעל אפו של עכבר במשך כמה שניות לפני ביצוע החתך הראשוני. חרטומו מורכב צינור חרוטי 50cc מלא גזה. מחצית התחתון של הצינור הוא לגזור יצירת מרחב עבור אפו של העכבר כדי לנוח בפנים ללא מגע. כובע (בחלק התחתון של מיכל אחסון רקמות) ממוקם על קצה של חרוטי 50cc כדי להבטיח את אדי isoflurane לא לברוח. לאחר נשימה של החיה מתחילים להאט, חתך קטן 4-5mm עשוי בעור במקביל שריר שמאל אלכסונית פנימי של הבטן השריר שמאל abdominus רוחבי. Dissection של וריד עורק הירך ומלווה. הקפד לא לפגוע השרירים המקיפים או עצבים לגעת. כדי להתחיל את זה לנתיחה, להפריד את רקמת שומן מן שרירי הבטן אלכסונית ו רוחבי על ידי גרירה של רקמה שומנית עם dumonts על חיבור הבטן. משוך את רקמת מהקיר השריר. ואז, בוטה לנתח לאורך שרירי הבטן מתגרה ממנו fascia ורקמת השומן באמצעות זוג אחר של dumonts. רק מתחת רקמת השומן זה השקר וריד עורק הירך יחד עם עצב הירך. * הקפד לא לפגוע intermedius vastus, medialis, שרירים lateralis של הארבע femoris או femoris rectus. אין באמת שום צורך לחטוף או אפילו לגעת את השרירים האלה. * אין לגעת עצב הירך משם לנתח את העצב על ידי גרירה של רקמה שומנית שנמצאת לידו. משוך את רקמת רוחבית מן הוריד העורק העצב יעברו כפי שהוא מוטבע רקמה זו. כמו עצב משוך רוחבית, בוטה לנתח את fascia ידי הנחת dumonts אחרות, הצבע למטה, נגד העורק ואת הפתיחה והסגירה אותם. הכלים הם שטחיים מאוד כדי להיות בטוח שלאלחפור את השרירים הבסיסית. אחרי העצב מופרד, השתמש dumonts להפריד את fascia החזקת כלי לשרירים. שמור dumonts הסגור להחליק הגבי dumonts לכלי. כאשר קצה dumonts מופיע בצד השני של הווריד, לפתוח אותם כדי להקהות לנתח את fascia. שמור על הגב dumonts לכלי השיט לתפוס את תפר הראשון. שים את תפר לתוך dumonts ומשוך תפר בחזרה דרך הפתח בין כלי ושרירי הבסיסית. שוב, אין צורך לכל נזק השריר שמסביב. שים סך של 3, 6-0 תפרים סביב הווריד והעורק. תפר 1 הוא הפרוקסימלי ביותר של שרירי הבטן. לקשור קשר אלא להשאיר אותו רפוי hemostat אותו. הקצה הקעור של hemostat צריך לנוח על חלל הבטן של החיה. תפר 2 הוא דיסטלי ביותר במיקום. תפר זה יכול להיות קשור מיד ligating כלי ו hemostated, שוב הצד הקעור כלפי מטה. התפרים דיסטלי ו הפרוקסימלי משמשים למשוך את כלי מתוח (כדי למנוע איבוד דם) ולהרים אותם קצת כדי לסייע בהכנסת קטטר. 3 תפר הוא תפר תמיכה קטטר. המקום הזה תפר בין התפרים דיסטלי ו הפרוקסימלי. לקשור קשר רופף אשר ישמשו כדי לאבטח את הצנתר בתוך כלי הדם לאחר הכניסה. לאחר התפרים הם מאובטחים, לזהות את העורק על ידי דפנות כלי עבה. הוא לבן מאוד. לעשות חתך קטן בחלק העליון של העורק באמצעות microscissors. הפוך את החור הזה קרוב תפר הדיסטלית כך שיש כמות גדולה של עורק עבור החדרת קטטר הראשונית. השתמש dumonts כדי לפתוח את החור על ידי הנחת קצה אחד של dumonts לתוך לומן כלי העורקים וסגירת אותם בדפנות כלי הדם. הקפד תפר באמצע הוא בקרבה חור העורקים, כך שהוא יכול לשמש כדי להחזיק את הקטטר במקום לאחר הכניסה הראשונית. בעוד מחזיק את הקיר עורקי לדחוף את קטטר לתוך לומן תוך משיכת כלי שיט על הקטטר. קלות לקשור את תפר תמיכה באמצע להחזיק את הקטטר במקום. שחרר את hemostat הפרוקסימלי. שחרור זה לשחרר את תפר הפרוקסימלי ופתח מחדש את תפר סביב כלי הדם. בשלב זה, את לחץ הדם צריך לדחוף את הדם חזרה לתוך הקטטר. דם פועם צריך להיות גלוי הקטטר. החזק את כלי סביב קטטר עם אחד דומון ולהשתמש אחרים כדי לדחוף את הקטטר אל כלי השיט על 4-5mm. החזקת כלי סביב הקטטר מסייעת למנוע קריעה של העורק. קצה הקטטר צריך לנוח מתחת את השרירים הפנימיים abdominus עקיפה רוחבי. למניעת קרישי דם בשורה העורקים, לסגת דם לקטטר ולדחוף אותו בחזרה לתוך העכבר מספר פעמים להחדיר נוזלים heparinized. חזור על הליך זה עבור הרגל השנייה עבור cannulation הבילטרליים עורק הירך. הוק את החיה כדי לפקח על פרמטר פיזיולוגי, כלומר מנתח BPA-400 ולשטוף את קווי העורקי. שימו 1 או 2 טיפות של תמיסת מלח סטרילית לתוך הפתח כירורגית כדי לשמור על לחות הרקמה שמסביב. הקפד לשמור את האזור הזה רווי בכל ההליך. המקום שדה סטרילי הרוטב על החיה לאורך ההליך על מנת לשמור על סטריליות. המקום מכשירי ניתוח לתוך אלכוהול 70% ו לנגב אותם עם גזה סטרילית. שים אותם לתוך מעקר את החרוז חם ~ 20 שניות עבור עיקור בין בעלי חיים. הסר את מכשירי ניתוח ולרסס אותם עם אלכוהול 70% כדי לסייע להם להתקרר. מניחים אותם על משטח סטרילי. ודא שאין אלכוהול שמאל על המכשירים אשר לטפטף בחזרה את החיות הבאות. 2. Hemorrhagic הלם. במשך 15 דקות. מסגרת הזמן, כ 1 / 2 של נפח הדם של העכבר יבוטל להשגת לחץ הדם הממוצע של כספית 28-32mm. * לקבלת עכבר 25-27g נפח הראשונית של דם נסוגה כדי להשיג את הלחץ הרצוי 0.6cc כ פרוצדורה זו היא שיטה לחץ קבוע לעומת נפח קבוע. נהלים אלה יכולים, עם זאת להיות במעקב במשך הלחץ הן קבועות דימום נפח קבוע. בעוד במעקב עקבי, החיה תישאר בהלם המורגי עבור 1.5-3hours. כאשר החיה מנסה לפצות את לחץ הדם מתכוון מתחיל לעלות שוב מעט (גלוי באמצעות מנתח BP / HR) למשוך יותר דם כדי להשיג את הלחץ הרצוי. למרות תוספי מזון (0.05cc IP Nembutol) הם לעתים רחוקות צורך אי פעם במהלך ההליך HS, הנשמה חיה, תנועה זיף, בדיקות רפלקס, ואת הקריאה BP / HR הדיגיטלי יסייע לקבוע מתי חיה צריך תוסף של הרדמה. בעלי חיים נשמרים תחת המנורה על משטח חימום במחזור כדי לעזור לשמור על טמפרטורה של 36-37 מעלות צלזיוס בהליך הלם Hemorrhagic. טמפרטורה נבדק באמצעות בדיקה רקטלית. 3. החייאה. לאחר זמן הלם elapses, החיה החייאה (R) בעזרת האצבעות Lactated (LR) פתרון בהיקף קבוע של 3x כל כרך של החיה לשפוך דם. היקף LR מנוהל באמצעות משאבת מזרק מוגדר לוותר, בקצב קבוע, נפח מעל 15 דקות. מרווח. הסר את הקטטר ואת ולקשור כלי באמצעות 3 תפרים. משוך את הקטטר רק בעבר תפר הפרוקסימלית ועניבה זו תפר לגמרי. זה יהיה למנוע אובדן דם. תזרים בטחונות מונע את הגפיים האחוריות מלהפוך איסכמי. 4. הודעה Rescitation. אחרי R פתחים הן איבר האחוריות הם תפורים באמצעות תפר סטרילי 4-0 PDSII. הקלטת לולאה רופפת מוסר והחיות ממוקמים לכלוב נקי אשר נשמר על כרית חימום במחזור להתאוששות שלאחר כמה שעות. משככי כאבים חייב להיות מנוהל כמו חיות מתחילות להתעורר מן ההרדמה כדי לנהל כראוי את הכאב. עצירות (0.1mg/kg) מוזרק תת עורי כמו החיות להתחיל בפעילות גופנית, אך לא לפני, כדי לא לסכן את תפקוד מערכת הנשימה. השימוש ניטור אופרטיבית אגרסיבי הודעה כמו מוצדקת על ידי פרוטוקול שאושר IACUC, התנהגות בעלי חיים בודדים, ומצבים רפואיים הנוכחית מומלץ. 4. הסודות להצלחה: כאשר מנתחים את כלי, הקפידו שלא לגעת בעצבים עצם הירך הקפד לא לפגוע femoris rectus, rectus lateralis ו vastus השרירים medialis. אין באמת שום צורך לחטוף או אפילו לגעת את השרירים האלה. לא עושים את זווית שיפוע של הקטטר חדה מדי כמו זה יוביל הקטטר היציאה לומן ודימום בלתי מבוקרת הקפד לקחת את המאמץ הנוסף להישאר סטרילי ככל האפשר. ודא שאין בועות אוויר בתוך כל אחת ממערכות קטטר או מתמר. ודא כי נוזל LR ב מתמר בזמן שהוא מבצע. לרוץ יבש עלול לגרום נזק למערכת BP שלך. הפוך את החור עורקים קטנים. הפוך את החור עורקי קרוב תפר הדיסטלית. Push קטטר תוך משיכת כלי מעליו עבור הכניסה קטטר כדי למנוע קריעה של העורק. הקפד לשמור את פתחי כירורגית ברגליים רווי מלח סטרילית כדי למנוע נזק בלתי מבוקר של רקמות או אובדן הנוזלים. סבלנות עדינות הם קריטיים. שימו לב קרוב הפיזיולוגיה של החיה לאורך הניסוי. 5. הודעה חששות Operative: בדוק איסכמיה ברגל. למרות זרימת בטחונות צריך למנוע את זה. בעלי חיים יכול להיות בעיות באמצעות הגפיים האחוריות כתוצאה של מניפולציה כירורגית דלקת הקשורים. ניהול כאב כראוי. נגיעה ובהמשך פגיעה העצב יכול להוביל לחוסר יכולת של בעל החיים לגייס.