حجم ثابت أو ضغط ثابت : نموذج الفئران من الصدمة النزفية
Summary
لقد كان النموذج الصدمة النزفية مورد موثوق بها وقابلة للتكرار تسهيل تحديد وفهم الإشارات شلالات المرتبطة الالتهاب والضرر نهاية الجهاز بعد الصدمة. توفر هذه المقالة وصفا خطوة بخطوة من الجوانب الجراحية والميكانيكية المرتبطة الداخلي الصدمة النزفية التجريبية في الفئران.
Abstract
فمن المعروف أن فقدان الدم الحاد والإصابات يمكن أن تؤدي إلى سلسلة من الأحداث الضارة الناجمة غالبا ما يشير الى وفيات في 1 ، 2 ، 3 ، 4 ، 5 يشير الى هذه الأحداث يمكن أيضا أن تؤدي إلى تعفن الدم و / أو ضعف الجهاز متعددة (MOD ) 6 ، 7 ، 8 ، 9 ومن ثم الحاسمة للتحقيق في أسباب وظيفة المناعة قمعها وضارة شلالات إشارات من أجل تطوير طرق أكثر فعالية لمساعدة المرضى الذين يعانون من الإصابات. النزفية 10 هذا ضغط ثابت الصدمة (HS) الداخلي ، على الرغم من صعوبة من الناحية الفنية ، هو مصدر ممتاز للتحقيق في هذه الظروف الفسيولوجية المرضية. 11 ، 12 ، 13 السلف في تقييم النظم البيولوجية ، أي نظم علم الأحياء مكنت المجتمع العلمي إلى زيادة فهم شبكات فيزيولوجية معقدة وأنماط الاتصالات الخلوية (14). وقد أثبتت صدمة نزفية ليكون أداة حيوية لكشف هذه الأنماط الاتصالات الخلوية من حيث صلتها الوظيفة المناعية 15 ، يمكن أن تتقن 16 ، 17 ، 18 هذا الإجراء! ويمكن أيضا أن تستخدم هذا الإجراء من حيث حجم التجارة إما ثابتة أو ثابتة نهج الضغط. نحن تكييف هذه التقنية في النموذج الفأري لتعزيز البحوث في وظيفة المناعة الفطرية والتكيف 19 ، 20 ، 21 ونظرا لصغر حجمها HS في الفئران تحديات فريدة من نوعها. ولكن نظرا إلى سلالات الفأر المتاحة كثيرة ، وهذا النوع يمثل موردا لا مثيل لها لدراسة ردود الفعل البيولوجية. طراز HS هو نموذج مهم لدراسة أنماط الاتصالات الخلوية وردود أنظمة مثل أنظمة الوسيط الهرمونية والتهابات ، وإشارات الخطر ، ورطب أي upregulation PAMP لأنها تثير ردود المتميزة التي تختلف عن غيرها من أشكال الصدمة. 22 ، 23 (24 عاما) قد قدمت 25 وتطوير سلالات الفئران المعدلة وراثيا وتحريض وكلاء بيولوجي لتثبيط إشارات محددة فرصا قيمة لتوضيح مزيد من فهمنا للصعودا ونزولا تنظيم نقل الإشارة بعد فقدان الدم الشديد ، والصدمة HS أي 26 و 27 ، 28 ، 29 ، 30.
هناك طرق عديدة الانعاش (R) بالتعاون مع والصدمة HS 31 ، يستخدم 32 و 33 و 34 ألف الإنعاش حجم ثابت طريقة حل الجرس lactated فقط (من اليسار) ، أي ما يعادل ثلاثة أضعاف حجم سفك الدم ، في هذا النموذج لدراسة الآليات الذاتية مثل إصابة الجهاز البعيد والالتهابات الجهازية. ثبت 35 ، 36 ، 38 هذا الأسلوب من الإنعاش لتكون فعالة في تقييم آثار الصدمات النفسية وHS 38 و 39.
Protocol
1. وإعداد صك الجراحية الميدانية : 1. إعداد الصك. يتم تنفيذ كافة العمليات الجراحية باستخدام تقنيات العقيم. وتستخدم وسادة الجراحية المعقمة خلع الملابس الزرقاء والميدان. يتم تعقيم جميع المواد والأدوات قبل استخدامها. يتم تعقيم الأوتوكلاف 6-0 خياطة ، أدوات تطبيقها غيض من القطن والشاش ، الذكور الذكور الصمامات 3 الطريق ، والصكوك. محولات الطاقة ، PE – 50 ، وأنابيب PE – 10 وأكسيد الإثيلين تعقيمها. وردت جميع الصمامات 3 في اتجاه والمحاقن والإبر المعقمة. يتم قطع 6-0 خياطة الى 1 بوصة قطعة (6 قطع / الحيوان) ووضعها في أكياس التعقيم الصغيرة. يتم وضع القطن غيض تطبيقها والساحات الشاش 4×4 ، وبين الذكور والذكور والصمامات 3 الطريق إلى إما صغيرة أو متوسطة الحجم والحقائب التعقيم تعقيمها. يتم تعقيم تعقيم الأدوات الجراحية لدينا كل مساء. يتم غسلها بعد الجراحة باستخدام صابون مضاد للجراثيم وماء الصنبور. يسمح لهم حتى يجف على لوحة زرقاء نظيفة الجراحية. وبعد ذلك وضعت بعناية في الحقيبة وتعقيمها التعقيم لاستخدامها في اليوم التالي. منذ محولات الطاقة والأنابيب والمكونات البلاستيكية ، يجب تعقيمها باستخدام غاز الاثيلين أنهم أي أوكسيد. يتم قطع أنابيب PE – 10 إلى 5 بوصة القطع وضعها في كيس صغير التعقيم. PE – 50 هو قطع الأنابيب إلى 18 بوصة القطع ووضعها في كيس التعقيم المتوسط. 2. الجراحية الميدانية. لانشاء هذا المجال الجراحي ، أولا ، بدوره على حبة تعقيم الساخنة لضمان وصولها إلى درجة الحرارة المناسبة ، 300-350 درجة فهرنهايت قبل البدء في عملية جراحية. ثم الشروع في الخطوات المقبلة من خلال وضع منصات الزرقاء الجراحية لأسفل على الكحول محو الفوق. لوحة واحدة يمر تحت المجهر ، والآخر يذهب على منصة تداول التدفئة حيث توجد محللات BP. مكان حقل عقيمة خلع الملابس الزرقاء على حد سواء على منصات الجراحية. شغل أداة الفولاذ المقاوم للصدأ درج 1 / 3 من الطريق مع الكحول 70 ٪. يكفي استخدام EtOH 70 ٪ لتغطية جميع الأدوات الجراحية. استخدام الملابس منفصلة مجال معقم ووضعه بجانب المجهر. وضع جميع الأدوات المعقمة ، خياطة والشاش ، والقسطرة في هذا المجال العقيمة. كن حذرا عند فتح الأدوات المعقمة وخياطة عدم تلويث لهم عن طريق لمس منهم. فمن الأفضل استخدام قفازات معقمة عند القيام بهذا الإجراء الإعداد. 2. الميكانيكية انشاء والإجراءات : 1. القسطرة مجموعة المتابعة. لانشاء القسطرة الساق اليمنى الفئران المستخدمة لقياس BP ، أولا ، وضعت على قفازات معقمة. ثم الحصول على العقيمة PE – 10 أنابيب من الحقيبة تعقيمها. الاستيلاء على وسط الأنبوب مع إصبع الإبهام ومؤشر ترك عن شبر واحد بينهما. تمدد هذا الجزء من الأنبوب قليلا لجعله أرق في قطر للمساعدة في إدخال القسطرة. بعد قص أنابيب تمتد إلى نصفين باستخدام مقص العقيمة. ينبغي للأنابيب 5 بوصة يمكن الآن ما يقرب من قطعتين 2 ½ بوصات في الطول. تأكد من شطبة نهاية تمدد. * لا زاوية مشطوف حافة كثيرا لأن ذلك قد يزيد من فرص الخروج من التجويف بوكز من خلال الجدار السفلي من السفينة. ادخال ابرة 30G في نهاية حادة غير المتمدد من الأنبوب. الحصول على حقنة معقمة 1cc ومحبس 3 الطريقة. استخدام الكحول لتعقيم مسح الجزء العلوي من قارورة تحتوي على 10cc العقيمة الحل heparinized المالحة (0.1ml Heparin/9.9ml مالحة). ملء الحقنة مع 0.7cc – 0.6 الحل الهيبارين. إرفاق الإبرة 30G والقسطرة إلى نهاية الطريق – 3 التي يتم مباشرة عبر من نهاية الذكور. ملء محبس وإبر 30G ، وأنابيب PE – 10 مع الحل الهيبارين. التأكد من الحصول على جميع فقاعات الهواء من النظام. الطريقة الأكثر فعالية لإزالة جميع فقاعات الهواء هي استخدام الجاذبية. نقطة الإبرة نحو الأرض في حين أن السماح للأنابيب تتدلى إلى الفوق. منح مركز إبرة نفض الغبار من الأصابع والفقاعات التي سوف تطفو الى الاعلى من الحل الهيبارين. إزالة الإبرة من الطريقة 30G – 3 وإزالة الفقاعات. سحب السوائل في الظهر 3 الطريق إلى حقنة لإزالة أي 1cc الفقاعات التي محاصرون في الطريق – 3 وأعد الأنبوب إلى الطريقة – 3. ينبغي 1cc تقريبا من خليط البقاء في المحاقن. وسوف تتلقى الماوس 0.05cc حول هذا الخليط (نتيجة للبيغ القسطرة للحفاظ على سالكية الإدراج) ، ما يعادل حوالي الهيبارين 1U / الماوس. هذا مكان القسطرة على الانتهاء مجال الملابس المعقمة مع الأدوات الجراحية. لانشاء القسطرة الساق اليسرى الفئران اتباع الإجراء ذاته على النحو المبين أعلاه مع استثناء من محبس 3 الطريقة. يستخدم الساق اليسرى لرسم الدم وغير مطلوب محبس 3 الطريقة. آخر ملء محقنة معقمة 1cc مع 0.2cc – 0.15 من خليط من المياه المالحة heparinized. عقف الإبرة و30G tubi PE – 10نانوغرام مباشرة إلى حقنة 1cc. ملء هذا القسطرة الساق اليسرى النظام مع الحل. إزالة الفقاعات من هذا النظام أيضا. مكان القسطرة على أكمل الحقل عقيمة خلع الملابس مع الصكوك العقيمة. 2. تعيين محول الهاتفي. عقف محول العقيمة إلى محلل DIGI – 400 بفندق BPA وفقا للمواصفات الدقيقة ميد. إرفاق محبس 3 وسيلة لكلا طرفي محول. حقنة ملء 10cc مع الحل Lactated رينغر (من اليسار) ، وإرفاقه بذلك الطريق – 3 محول والاستلقاء على الفوق. ادخال ابرة في 23G طرفي قطعة من قبل القطع presterilized 18 بوصة PE – 50 الأنابيب. تعلق واحدة من نهاية الأنبوب PE – 50 على طريقة – 3 مع حقنة 10cc المرفقة. سد الطريق و3 – PE – 50 مع انشاء LR. التأكد من الحصول على جميع فقاعات الهواء من نظام كما هو موضح في المقطع السابق. أعد 3 الطريق إلى محول ومحول ملء الثانية و 2 3 من الأشكال مع LR. أخيرا ، ونعلق على المعدن الذكور الذكور leur قفل محبس إلى الإبرة 23G للأنابيب PE – 50 عن التعلق القسطرة الساق اليمنى الفئران. * ومن الأهمية بمكان أن تبقى في السائل عند محول في العملية. * اتبع المعايرة وفقا للإجراءات صفر مايكرو المتوسطي البروتوكول. 3. الجراحية والإجراءات التجريبية : 1. الإجراءات الجراحية. تبدأ بالإدارة حقنة داخل الصفاق من الصوديوم Pentobarbitol (Nembutol) (70mg/kg تخفيف 01:10 @). ويتم إنجاز هذا الإجراء ، أولا ، التقاط ما يصل الماوس من قفصه باستخدام قاعدة (النهاية معظم الداني) من ذيله. المقبل ، وضع على رأس الحيوان من القفص ، بينما ما زالت تحتجز ذيله. الاستيلاء على القفا رقبة الفأر مع الابهام والاصبع الوسطى على جانبي الماوس فقط وراء forepaws. يستخدم السبابة لسحب الجلد على المنطقة الرأس / العنق نحو العودة الى القفا لشل حركة الرأس. يتم تغليف ثم ذيل الفأر والتي عقدت بين الاصبع الصغير والبنصر ، بينما يتم الضغط على البنصر في المنطقة القطنية من العمود الفقري الفأر. ينبغي أن تكون نائما الماوس في غضون 5 دقائق. بعد تخدير الحيوان هو مكان لهم على لوحة معدنية جراحية في موقف ضعيف. يتم استخدام تقنية الشريط حلقة فضفاضة لشل حركة الحيوانات بواسطة تسجيل القصوى بهم. تقنية حلقة فضفاضة ينطوي سلق شرائح رقيقة من الشريط والشريط فضفاضة التفاف حول كل من أطرافه السفلية الصدارة إلى مخلب وحول كل واحد من أطرافه السفلية للهند مخلب. عالق ثم الشريط مرة أخرى إلى نفسه ، ويعلق على اليسار الشريط إلى متنها. هذا يسمح للالقصوى من الفئران ليتقلد منصبا تشريحية أكثر طبيعية. ثم يتم حلق المناطق الحيوان في البطن والأربية باستخدام اوستر حجم A5 كليبرز 40 النصل. ووصب والشاش 4×4 مع betadine وتمحى ثم منطقة الجراحية للعقم. بعد الشلل والتعقيم ، ويوضع مخروط الأنف مع 1cc isoflurane من خلال الأنف الماوس ، لبضع ثوان قبل إجراء شق الأولي. مخروط الأنف يتكون من أنبوب مخروطي 50cc ل مليئة الشاش. هو قطع نصف الجزء السفلي من الأنبوب إلى خلق مساحة للأنف الماوس ، للراحة داخل دون اتصال. يتم وضع سقف (قاع حاوية تخزين الأنسجة) إلى نهاية مخروطية 50cc إلى ضمان الأبخرة isoflurane لا الهرب. بمجرد التنفس الحيوان يبدأ بطيئا ، يرصد صغير 4 – 5mm شق في الجلد موازية لترك العضلات المائلة الداخلية من البطن وعضلات البطن اليسرى عرضية. تشريح الوريد الفخذي والشريان التالي. تأكد من عدم تلف الأعصاب أو العضلات المحيطة اللمس. لبدء هذه تشريح ، فصل الأنسجة الدهنية من عضلات البطن المائلة والعرضي عن طريق الاستيلاء على الأنسجة الدهنية مع dumonts في اتصال البطن. سحب هذا النسيج بعيدا عن الجدار العضلي. ثم ، تشريح حادة على طول عضلات البطن إغاظة بعيدا اللفافة والأنسجة الدهنية به الزوج الآخر من dumonts. فقط تحت هذه الأنسجة الدهنية تكمن في الوريد والشريان الفخذي مع العصب الفخذي. * تأكد من عدم تلف المتوسط للالمتسعة ، الإنسي والوحشي للعضلة الفخذ الرباعية للالفخذية المستقيمة أو. هناك حقا لا حاجة لانتزاع أو حتى تلمس هذه العضلات. * لا تلمس الأعصاب الفخذ تشريح الأعصاب بعيدا عن طريق الاستيلاء على الأنسجة الدهنية التي تقع بجانبه. سحب هذا النسيج أفقيا من الوريد والشريان والعصب سيتبع كما هو مضمن في هذا النسيج. كما يتم سحب العصب أفقيا ، وكليلة تشريح اللفافة عن طريق وضع dumonts الأخرى ، وأشر إلى أسفل ، ضد الشريان وفتح وإغلاقها. سفن سطحية للغاية لذا يجب التأكد من عدمحفر في العضلات الأساسية. بعد فصل العصب ، استخدم dumonts لفصل اللفافة عقد السفن للعضلات. إبقاء dumonts مغلقة وزلة dumonts الظهرية للسفن. كما غيض من dumonts يظهر على الجانب الآخر من الوريد ، وفتح لهم لفظة تشريح اللفافة. الحفاظ على ظهري dumonts إلى السفينة والاستيلاء على الخيط الأول. وضع الخيط في dumonts وسحب الخيط مرة أخرى من خلال فتح الذي تم بين السفن والعضلات الأساسية. مرة أخرى ، ليست هناك حاجة إلى أي تلف العضلات المحيطة بها. وضع ما مجموعه 3 ، 6-0 خيوط حول الوريد والشريان. خياطة (1) هي الأقرب إلى معظم عضلات البطن. عقدة التعادل ولكن تترك فضفاضة ومرقئ تشغيله. وينبغي على حافة مقعر من مرقئ الباقي على التجويف البطني للحيوان. خياطة (2) هي الأكثر القاصي في الموقع. ويمكن ربط هذا الخيط قبالة ligating على الفور السفن وhemostated ، ومرة أخرى الجانب المقعر إلى أسفل. يتم استخدام خيوط القاصي والداني لسحب السفن مشدود (لمنع فقدان الدم) ، ورفعها قليلا للمساعدة في إدخال القسطرة. الدرز 3 هو دعم خياطة القسطرة. هذا مكان الدرز بين القاصي والداني الغرز. عقدة التعادل فضفاضة التي سيتم استخدامها لتأمين القسطرة داخل السفينة بعد الإدراج. بعد الغرز آمنة ، وتحديد الشريان بواسطة جدار الوعاء الدموي سميكة. إنه أبيض جدا. إجراء شق صغير في الجزء العلوي من الشريان باستخدام microscissors. جعل هذا الثقب على مقربة من الدرز البعيدة حتى لا يكون هناك كمية وافرة من الشريان للقسطرة الإدراج الأولي. استخدام dumonts لفتح ثقب من خلال وضع واحدة من نهاية dumonts في التجويف سفينة الشرايين وإغلاقها على جدار الوعاء الدموي. تأكد من أن الدرز الوسطى هي الأقرب إلى الحفرة الشرايين بحيث يمكن استخدامه لاجراء القسطرة في مكانها بعد الإدراج الأولي. في حين عقد جدار الشرايين دفع القسطرة في التجويف في حين سحب السفينة خلال القسطرة. التعادل طفيفة أسفل الدرز دعم الاوسط لاجراء القسطرة في مكانها. الافراج عن مرقئ القريبة. سيكون هذا الإصدار تخفيف خياطة القريبة وإعادة فتح الدرز حول السفن. في هذه النقطة ، يجب الضغط الشرياني دفع الدم مرة أخرى إلى القسطرة. وينبغي أن تكون مرئية الدم النابض في القسطرة. عقد سفن حول القسطرة واحد دومون واستخدام أخرى لدفع القسطرة في الإناء عن 5mm – 4. عقد السفينة حول القسطرة تساعد على منع تمزق الشريان. ينبغي للطرف القسطرة بقية فقط تحت عضلات البطن الداخلية المائل والعرضي. لمنع تجلط الدم في الشرايين الخط ، وسحب الدم إلى القسطرة ودفعها مرة أخرى إلى الماوس عدة مرات للبث السائل heparinized. كرر هذا الإجراء الساق الأخرى لإقناء ؛ إدخال القنية الثنائية شريان الفخذ. ربط الحيوان حتى رصد المعلمة الفسيولوجية ، أي محلل BPA – 400 وتدفق خطوط الشرياني. وضع 1 أو 2 قطرات من المياه المالحة عقيمة في الفتحة الجراحية للحفاظ على رطوبة الأنسجة المحيطة بها. تأكد من إبقاء هذه المنطقة المشبعة في جميع أنحاء الداخلي. مكان حقل عقيمة خلع الملابس على الحيوان في جميع أنحاء الإجراء للمساعدة على الحفاظ على العقم. مكان الأدوات الجراحية في 70 ٪ كحول والقضاء عليها مع شاش معقم. وضعها موضع معقم حبة ساخنة لل20 ثانية ~ لتعقيم بين الحيوانات. إزالة الأدوات الجراحية وترشها مع الكحول 70 ٪ لمساعدتهم على تهدئة. وضعها على لوحة العقيمة. تأكد من عدم وجود الكحول اليسار على الصكوك التي سوف بالتنقيط العودة الى الحيوانات المقبل. 2. صدمة نزفية. على مدى 15min. الإطار الزمني ، ويتم سحب حوالي 1 / 2 من حجم الدم الماوس ، تحقيق الضغط الشرياني يعني من 28 – 32mm الزئبق. * بالنسبة للماوس 25 27G حجم الأولي لسحب الدم لتحقيق الضغط المطلوب هو حوالي 0.6cc هذا الإجراء هو وسيلة ضغط ثابت بدلا من وحدة تخزين ثابتة. يمكن ، ولكن هذه الإجراءات الواجب اتباعها لكل من ضغط ثابت وثابت حجم النزف. في حين يجري رصده باستمرار ، وسوف يظل هذا الحيوان في حالة من الصدمة النزفية ل3hours – 1.5. والحيوان يحاول تعويض والضغط الشرياني يعني يبدأ في الارتفاع مرة أخرى بشكل طفيف (مرئية عبر محلل بي بي / HR) سحب مزيد من الدماء لتحقيق الضغط المطلوب. على الرغم من ونادرا ما يكمل (0.05cc Nembutol IP) في حاجة من أي وقت مضى أثناء إجراء HS ، وتنفس الحيوان ، وحركة ضئيلة للغاية ، اختبارات المنعكس ، وBP / HR قراءة رقمية تساعد على تحديد الاحتياجات عندما حيوان ملحق التخدير. يتم الاحتفاظ الحيوانات تحت المصباح وعلى وسادة التدفئة تعميم للمساعدة في الحفاظ على درجة حرارة من 36-37 درجة مئوية خلال إجراء الصدمة النزفية. يتم فحص درجة الحرارة عن طريق المستقيم التحقيق. 3. الانعاش. بعد وقت الصدمة العربدوفاق ، هو إحياء للحيوان (R) باستخدام قارعو الأجراس Lactated (من اليسار) حل في حجم ثابت من كل حيوان 3X تسليط حجم الدم. إدارة حجم LR عبر ضخ حقنة لتعيين الاستغناء ، بمعدل ثابت ، وعلى مدى حجم 15min. الفاصل الزمني. إزالة القسطرة والأوعية ligate باستخدام خيوط 3. سحب القسطرة فقط خياطة القريبة الماضية وربط هذا الخيط بشكل كامل. وسوف تمنع أي فقدان الدم. تدفق ضمانات يمنع من أن تصبح أطرافه الخلفية الدماغية. 4. آخر Rescitation. بعد R هي مخيط على حد سواء فتحات أطرافهم هند يصل به العقيمة خياطة PDSII 4-0. تتم إزالة الشريط حلقة فضفاضة وتوضع الحيوانات في قفص النظيفة التي يتم الاحتفاظ بها على وسادة التدفئة المنتشرة في العديد من الانتعاش بعد ساعات. يجب أن تدار مسكن والحيوانات من أجل ايقاظ تبدأ من التخدير بشكل مناسب لإدارة الألم. البوبرينورفين (0.1mg/kg) يحقن تحت الجلد مثل الحيوانات تبدأ ممارسة النشاط البدني ، ولكن ليس قبل ذلك ، بحيث لا تسوية وظيفة الجهاز التنفسي. فمن المستحسن استخدام العدوانية آخر رصد المنطوق كما تبرره بروتوكول افق IACUC والسلوكيات الحيوانية الفردية ، والظروف الطبية الحالية. 4. أسرار للنجاح : عند تشريح السفن ، تأكد من عدم لمس العصب الفخذي تأكد من عدم تلف الفخذية المستقيمة ، المستقيمة الوحشية ، والعضلات العضلة المتسعة الإنسية. هناك حقا لا حاجة لانتزاع أو حتى تلمس هذه العضلات. سوف لا نقع في زاوية من شطبة القسطرة حادة جدا لأن هذا يؤدي إلى الخروج من التجويف القسطرة ونزيف غير المنضبط تأكد من أن تتخذ مزيدا من الجهد لتبقى عقيمة ممكن. تأكد من وجود فقاعات الهواء في NO أي من أنظمة قسطرة أو محول. تأكد من أن محول LR السوائل في أثناء وجوده في العملية. ويمكن أن تجف الضرر الخاص بي النظام. جعل ثقب في الشرايين الصغيرة. جعل ثقب في الشرايين القريبة من الدرز القاصي. دفع القسطرة في حين سحب السفينة في وقت واحد أكثر من ذلك لإدخال القسطرة من أجل تجنب تمزق الشريان. تأكد للحفاظ على الفتحات الجراحية في الساقين مشبعة المالحة عقيمة لمنع تلف الأنسجة غير المنضبط أو فقدان السوائل. صبر ودقة بالغة الأهمية. دفع اهتمام وثيق لفسيولوجيا الحيوان في كافة مراحل التجربة. 5. آخر المخاوف من المنطوق : تحقق من وجود نقص التروية في الساق. على الرغم من أن تدفق ضمانات تحول دون ذلك. يمكن أن يكون مشكلة في استخدام الحيوان أطرافه الخلفية نتيجة للتلاعب الجراحية والالتهاب المرتبطة بها. إدارة الألم بشكل مناسب. ويمكن لمس وإلحاق أضرار في وقت لاحق إلى العصب يؤدي إلى عدم قدرة الحيوان على تعبئة.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
مصدر التمويل / رقم البيولوجيا الجزيئية من الصدمة النزفية GM053789
Materials
| Instrument | Manufacturer | Catalogue Number |
|---|---|---|
| Dumonts(SS/45° angle 0.2×0.12mm-tip, 13.5cm length) | Fine Science Tools | 11203-25 |
| Surgical scissors (straight-12cm) | Fine Science Tools | 14068-12 |
| Hemostats (curved-12.5cm) | Fine Science Tools | 13009-12 |
| Microscissors (spring scissors- straight-8cm) | Fine Science Tools | 15000-00 |
| Forceps (0.8mm-tip, curved-10cm) | Fine Science Tools | 11050-10 |
| suture reel 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 |
| suture 4-0 PDSII | Penn Vet | ETHZ304H |
| gauze 4×4 | can be purchased through any global vendor | |
| cotton-tip applicator | can be purchased through any global vendor | |
| 30G needle | can be purchased through any global vendor | |
| 23G needle | can be purchased through any global vendor | |
| 3cc syringe | can be purchased through any global vendor | |
| 5cc syringe | can be purchased through any global vendor | |
| 10cc syringe | can be purchased through any global vendor | |
| 50cc conical tube | can be purchased through any global vendor | |
| 1cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 |
| Polyethylene 10 tubing 100` (PE-10) | Fisher Scientific | 14-170-12P |
| Polyethylene 50 tubing 100` (PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B |
| 3-way stopcock | Fisher Scientific | NC9779127 |
| surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 |
| Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 |
| tape rolls 1″ | Corporate Express | MMM26001 |
| straight side wide mouth jars (used as cap for nose cone) | VWR | 159000-058 |
| stainless steel tray 8″ x 11″ | VWR | 62687-049 |
| male-male leur lock 3-way | VWR | 20068-909 |
| sterilization pouch 3″x8″ | VWR | 24008 |
| sterilization pouch 5″x10″ | VWR | 24010 |
| Wild M650 microscope w/ boom stand | Leica | |
| Leica IC D digital camera/live image | Leica | |
| Digi-Med BPA-400 analyzer & systems integrator | Micro-Med | SYS-400 |
| TXD-310 (Digi-Med Transducer) | Micro-Med | TXD-300 |
| Computer | Dell | |
| Hot bead instrument sterilizer | VWR | 18000-45 |
| Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR | 10749-020 |
| circulating heating pad 18×26 | Harvard | py872-5272 |
| rectal thermometer | Kent Scientific | RET-3 |
| Reagent | Concentration | Manufacturer | Catalogue Number |
|---|---|---|---|
| Pentobarbital Sodium (Nembutol Sodium Solution) | 70mg/kg | Ovation | |
| Buprenorphine HCl | 0.1mg/kg | Bedford Laboratories | |
| Lactated Ringers Injection 250cc IV bag | Baxter | ||
| Aerrane (Isoflurane) | 99.9% | NLS Animal Health | 105996 |
| Heparin Sodium | 1000U | Abraxis | |
| Bacteriostatic Sodium Chloride | 0.9% | Hospira | |
| Ethyl Alcohol | 70% | Pharmaco-AAPER | |
| Triadine Povidone Iodine (Betadine) | Triad disposables |
References
- Baker, C. C., Oppenheimer, L., Stephens, B. Epidemiology of trauma deaths. Am J Surg. 140, 44-50 (1980).
- Hierholzer, C., Billiar, T. R. Molecular mechanisms in the early phase of hemorrhagic shock. Langenbeck’s Arch Surg. 386, 302-308 (2001).
- Dutton, R. P., Stansbury, L. G., Leone, S., Kramer, E., Hess, J. R., Scalea, T. M. Trauma Mortality in Mature Trauma Systems: Are We Doing Better? An Analysis of Trauma Mortality Patterns. J Trauma. , (2010).
- Frink, M., van Griensven, M., Kobbe, P., Brin, T., Zeckey, C., Vaske, B., Krettek, C., Hildebrand, F. IL- 6 predicts organ dysfunction and mortality in patients with multiple injuries. Scand J Trauma Resusc Emerg Med. 17, 49-49 (2009).
- DeCamp, M. M., Demling, R. H. Posttraumatic multisystem organ failure. JAMA. 260, 530-534 (1988).
- Faist, E., Baue, A. E., Dittmer, H., Heberer, G. Multiple Organ Failure in Polytrauma Patients. Journal of Trauma. 23, 775-787 (1983).
- Kalff, J. C., Hierholzer, C., Tsukada, K., Billiar, T. R., Bauer, A. J. Hemorrhagic shock results in intestinal muscularis intercellular adhesion molecule (ICAM-1) expression, neutrophil infiltration, and smooth muscle dysfunction. Arch Orthop Trauma Surg. 119, 89-93 (1999).
- Kobbe, P., Stoffels, B., Schmidt, J., Tsukamoto, T., Gutkin, D., Bauer, A., Pape, H. C. IL-10 deficiency augments acute lung but not liver injury in hemorrhagic shock. Cytokine. 45, 26-31 (2009).
- Ulloa, L., Tracey, K. J. The ‘cytokine profile’ a code for sepsis. Trends in Mol. Med. 11, 56-63 (2005).
- Darwiche, S., Kobbe, P., Pfeifer, R., Kohut, L., Pape, H. C., Billiar, T. R. Pseudofracture: an acute peripheral tissue trauma model. J Vis Exp. , (2010).
- Tsukamoto, T., Pape, H. C. Animal models for trauma research: what are the options. Shock. 31, 3-10 (2009).
- Moochhala, S., Wu, J., Lu, J. Hemorrhagic shock: an overview of animal models. Front Biosci. 14, 4631-469 (2009).
- Chaudry, I. H., Ayala, A., Ertel, W., Stephan, R. N. Hemorrhage and resuscitation: immunological aspects. Am J Physiol Regulatory Integrative Comp Physiol. 259, 663-678 (1990).
- Lagoa, C. E., Bartels, J., Baratt, A., Tseng, G., Clermont, G., Fink, M. P., Billiar, T. R., Vodovotz, Y. The role of initial trauma in the host’s response to injury and hemorrhage: insights from a correlation of mathematical simulations and hepatic transcriptomic analysis. Shock. 26, 592-600 (2006).
- Prince, J. M., Levy, R. M., Yang, R., Mollen, K. P., Fink, M. P., Vodovotz, Y., Billiar, T. R. Toll-like receptor-4 signaling mediates hepatic injury and systemic inflammation in hemorrhagic shock. J Am Coll Surg. 202, 407-417 (2006).
- Meng, Z. H., Dyer, K., Billiar, T. R., Tweardy, D. J. Essential role for IL-6 in postresuscitation inflammation in hemorrhagic shock. Am J Physiol Cell Physiol. 280, C343-C351 (2001).
- McCloskey, C. A., Kameneva, M. V., Uryash, A., Gallo, D. J., Billiar, T. R. Tissue Hypoxia activates JNK in the liver during hemorrhagic shock. Shock. 22, 380-386 (2004).
- Li, Y., Xiang, M., Yuan, Y., Xiao, G., Zhang, J., Jiang, Y., Vodovotz, Y., Billiar, T. R., Wilson, M. A., Fan, J. Hemorrhagic shock augments lung endothelial cell activation: role of temporal alterations of TLR4 and TLR2. Am J Phsyiol Regul Integr Comp Physiol. 297, 1670-1680 (2009).
- Xu, Y. X., Ayala, A., Chaudry, I. H. Prolonged immunodepression after trauma and hemorrhagic shock. J Trauma. 44, 335-341 (1998).
- Abraham, E., Chang, Y. H. Haemorrhage-induced alterations in function and cytokine production of T cells and T cell subpopulations. Clin. Exp. Immunol. 90, 497-502 (1992).
- Peitzman, A. B., Billiar, T. R., Harbrecht, B. G., Kelly, E., Udekwu, A. O., Simmons, R. L. Hemorrhagic Shock. Curr Probl Surg. 32, 925-1002 (1995).
- Angele, M. K., Knoferl, M. W., Schwacha, M. G., Ayala, A., Cioffi, W. G., Bland, K. I., Chaudry, I. H. Sex steriods regulate pro- and anti- inflammatory cytokine release by macrophages after trauma-hemorrhage. Am. J. Physiol. 277, C35-C42 (1999).
- Takashi, K., Hubbard, W. J., Choudhry, M. A., Schwacha, M. G., Bland, K. I., Chaudry, I. H. Trauam- Hemorrhage induces depressed splenic dendritic cell function in mice. J of Immunology. 177, 4514-4520 (2006).
- Lenz, A., Franklin, G. A., Cheadle, W. G. Systemic inflammation after trauma. Injury, Int. J. Care Injured. 38, 1336-1345 (2007).
- Frei, R., Steinle, J., Birchler, T., Loeliger, S., Roduit, C., Steinhoff, D., Seibl, R., Buchner, K., Seger, R., Reith, W., Lauener, R. P. MHC class II molecules enhance Toll-like receptor mediated innate immune responses. PloS One. 5, 8808-8808 (2010).
- Matsutani, T., Anantha Samy, T. S., Kang, S. C., Bland, K. I., Chaudry, I. H. Mouse genetic background influences severity of immune responses following trauma-hemorrhage. Cytokine. 30, 168-176 (2004).
- Prince, J. M., Levy, R. M., Bartels, J., Baratt, A., Kane, J. M., Lagoa, C., Rubin, J., Day, J., Wei, J., Fink, M. P. In silico and in vivo approach to elucidate the inflammatory complexity of CD14-deficient mice. Mol Med. 12, 88-96 (2006).
- Kobbe, P., Stoffels, B., Schmidt, J., Tsukamoto, T., Gutkin, D. W., Bauer, A. J., Pape, H. C. IL-10 deficiency augments acute lung but not liver injury in hemorrhagic shock. Cytokine. 45, 26-31 (2009).
- Prince, J. M., Ming, M. J., Levy, R. M., Liu, S., Pinsky, D. J., Vodovotz, Y., Billiar, T. R. Early Growth Response 1 mediates the systemic and hepatic inflammatory response initiated by hemorrhagic shock. Shock. 27, 157-164 (2007).
- Matsutani, T., Samy, A. n. a. n. t. h. a., Kang, T. S., Bland, S. -. C., Chaudry, K. I., H, I. Mouse genetic background influences severity of immune responses following trauma-hemorrhage. Cytokine. 30, 168-176 (2005).
- Rushing, G. D., Britt, L. D. Reperfusion injury after hemorrhage: a collective review. Ann Surg. 247, 929-937 (2008).
- Makley, A. T., Goodman, M. D., Friend, L. W., Bailey, S. R., Lentsch, A. B., Pritts, T. A. Damage control resuscitation with fresh blood products attenuates the systemic inflammatory response following hemorrhagic shock. J Surg Res. 158, 423-423 (2010).
- Stansbury, L. G., Dutton, R. P., Stein, D. M., Bochicchio, G. V., Scalea, T. M., Hess, J. R. Controversy in trauma resuscitation: do ratios of plasma to red blood cells matter?. Transfus Med Rev. 23, 255-265 (2009).
- Gao, J., Zhao, W. X., Xue, F. S., Zhou, L. J., Yu, Y. H., Zhou, H. B. Effects of different resuscitation fluids on acute lung injury in a rat model of uncontrolled hemorrhagic shock and infection. J Trauma. 6, 1213-1219 (2009).
- Maier, S., Holz-Holzl, C., Pajk, W., Ulmer, H., Hengl, C., Dunser, M., Haas, T., Velik-Salchner, C., Fries, D., Greiner, A., Hasibeder, W., Knotzer, H. Microcirculatory parameters after isotonic and hypertonic colloidal fluid resuscitation in acute hemorrhagic shock. J Trauma. 66, 33-45 (2009).
- Stahel, P. F., Smith, W. R., Moore, E. E. Current trends in resuscitation strategy for the multiply injured patient. Injury. 40, 27-35 (2009).
- Dar, D. E., Soustiel, J. F., Zaaroor, M., Em, B., L, A., Shapira, Y., Semenikhina, L., Solopov, A., Krausz, M. M. Moderate lactated ringer’s resuscitation yields best neurological outcome in controlled hemorrhagic shock combined with brain injury in rats. Shock. , (2009).
- Moon, P. F., Hollyfield-Gilbert, M. A., Myers, T. L., Uchida, T., Kramer, G. C. Fluid compartment in hemorrhaged rats after hyperosmotic crystalloid and hyperoncotic crystalloid resuscitation. Am J Physiol. 270, F1-F8 (1996).
- Perel, P., Roberts, I. Colloids vs crystalloids for fluid resuscitation in critically ill patients. Cochrane Database System Rev. 4, CD000567-CD000567 (2007).
Cite This Article
Kohut, L. K., Darwiche, S. S., Brumfield, J. M., Frank, A. M., Billiar, T. R. Fixed Volume or Fixed Pressure: A Murine Model of Hemorrhagic Shock. J. Vis. Exp. (52), e2068, doi:10.3791/2068 (2011).