光トラップを用いた細菌細胞の曲げ剛性の測定

指数増殖期（OD = 0.2〜0.4）へのルリア – Beltraniブイヨン（LB）培地で大腸菌の細胞を成長する。 15分糸状成長を誘導し、遠心分離によって5回で文化を集中させるためのセファレキシンの50μg/ mLのを補充したLBの文化を成長する。 フローチャンバーに水で希釈した1％のポリエチレンイミンを流すことによりPEIでコーティングされたカバースリップを作り、5分間のインキュベーション後、水で洗ってください。 チャンバー内に濃縮された細胞培養を流れる、と結合されていない細胞を除去するために3分後にLBとセファレキシン（50μg/mL）の混合物で洗浄した。 37室のインキュベート° Cは、添付細胞が光トラッピング装置での配置の前に成長させること30分、1時間。 30分間水で希釈した0.1％ポリリジンで0.5μmの直径のポリスチレンビーズ（前髪ラボ）をインキュベートすることにより、ポリリジンでコーティングされたビーズを加えます。その後、ビーズを3回洗浄し、水に懸濁します。 セファレキシン（50μg/mL）を含むLBに2つの要因によってビーズ溶液を希釈し、そしてフローチャンバーにそれを追加します。 光学的にフローティングビーズをトラップし、細胞の自由な先端に触れる。 （我々は、サンプルの動きを制御するマッドシティLabsのピエゾステージを使用する。）適当なセル/ビーズの組み合わせが見つかると、アタッチされていないビーズを除去するLBのセファレキシン（50μg/mL）でチャンバーを洗浄する。 セルと記録力 – 変位のデータに曲げ力を適用するためにカスタムで作成されたLabVIEWプログラムを実行します。プログラムの詳細ラスタが検出レーザービームと記録3D PSDの電圧信号内に添付されたビーズを走査することにより、検出器の応答を較正します。 顕微鏡画像の細胞長軸を識別します。 細胞長軸に垂直な方向のステップでセルを移動します。 光トラップからの距離を移動し、変位を記録。 以前に測定されたトラップの剛性を使用して加えられる力に変位に変換し、ファイルへの先端の変位と力を保存します。 成功の秘訣：ステップ8で）、一つは、明確に定義されたスタックの端でセルを見つける必要があります。いくつかのセルは、一つの先端で立ち往生、および他の先端の曲げ力は、旋回ではなく、曲げ細胞全体につながるされています。適切なペアは、ジョイスティック制御の段階の動きを使って手作業で迅速に各セルを曲げることにより求められる。 代表的な結果： 図1この図は、単一のセルのための力-変位のデータを示しています。この直線の傾きは、セルの曲げ剛性である。