In-vivo-Imaging von transgenen Leishmania Parasiten in einer Live-Host
Summary
Ein<em> In vivo</em> Imaging-System wird verwendet, um quantitative Messungen der murinen Infektion mit dem Protozoon Trypanosomatid generieren<em> Leishmania</em>. Dies ist eine nicht-invasive und nicht-tödliche Methode zum Nachweis von Parasiten, die Luciferase in vielen Geweben im Verlauf der chronischen<em> Leishmania</em> Spp. Infektion.
Abstract
Verschiedene Arten von<em> Leishmania,</em> A einzelligen Parasiten der Familie<em> Trypanosomatidae</em>, Bewirken in der Regel verschiedene menschliche Krankheiten Manifestationen. Die häufigsten Formen der Krankheit sind viszerale Leishmaniose (VL) und kutane Leishmaniose (CL). Mausmodelle der Leishmaniose sind weit verbreitet, aber die Quantifizierung der Parasiten Belastungen während der murinen Krankheit erfordert Mäusen zu verschiedenen Zeitpunkten nach der Infektion eingeschläfert werden. Parasite Belastungen werden dann entweder durch Mikroskopie gemessen, Grenzverdünnung Assay oder qPCR-Amplifikation von Parasiten-DNA. Die<em> In vivo</em> Imaging-System (IVIS) verfügt über ein integriertes Softwarepaket, das die Erkennung eines Biolumineszenz-Signal mit Zellen in lebenden Organismen assoziiert werden können. Sowohl zur Minimierung der Nutzung und zur Infektion längs folgen in Individuen, in-vivo-Modellen für die Bildgebung<em> Leishmania</em> Spp. verursacht VL oder CL entstanden. Parasiten wurden entwickelt, um Luciferase auszudrücken, und diese wurden in Mäuse eingeführt entweder intradermal oder intravenös. Quantitative Messungen der Luciferase treibende Biolumineszenz der transgenen<em> Leishmania</em> Parasiten in der Maus wurden mit IVIS. Individual-Mäusen können mehrere Male während Längsschnittstudien abgebildet werden, so dass wir die Variabilität der Tiere in den ersten experimentellen Parasiten Inokula zu bewerten und die Vermehrung der Parasiten in Mausgeweben beurteilen. Parasiten sind mit hoher Empfindlichkeit in der Haut Standorten nachgewiesen werden. Zwar ist es sehr wahrscheinlich, dass das Signal (Photonen / Sekunde / Parasit) niedriger in tiefer innerer Organe als die Haut ist, sondern quantitative Vergleiche von Signalen in oberflächlichen Vergleich tiefe Standorte wurden nicht gemacht. Es ist möglich, dass Parasiten Zahlen zwischen Stellen des Körpers können nicht direkt miteinander verglichen werden, obwohl Parasiten Belastungen in den gleichen Geweben zwischen Mäusen verglichen werden kann. Beispiele eines visceralizing Arten (<em> L. infantum chagasi</em>) Und eine Art verursacht kutane Leishmaniose (<em> L. mexicana</em>) Angezeigt. Die IVIS Verfahren kann für die Überwachung und Analyse von kleinen Tiermodellen eine Vielzahl von verwendet werden<em> Leishmania</em> Arten verursachen die verschiedenen Formen der menschlichen Leishmaniose.
Protocol
Discussion
Die in vivo Imaging System (IVIS) stellt ein Verfahren zum ganzen Tier Bildgebung oder in-vivo-Bildgebung experimenteller Infektion Modelle der verschiedenen Formen der Leishmaniose. 18,16 Die Leishmania spp. Parasiten können gentechnisch Glühwürmchenluciferase auf einem Niveau, dass in vivo mit dem IVIS Imaging-Technologie erkannt wird ausdrücklich erklärt werden. Einer der wichtigsten Vorteile dieser Methode ist, dass es nicht-invasive Visualisierung von Leishman…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde teilweise durch einen Merit Bewertung Zuschuss aus dem Department of Veterans Affairs finanziert, die von NIH gewährt AI045540, AI067874, AI076233-01 und AI080801 (MEW), und durch AI29646 (SMB). Die Arbeit wurde zum Teil während der Finanzierung von CT und JG von NIH T32 AI07511 durchgeführt.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| D-Luciferin Potassium Salt | Reagent | Caliper LifeSciences (Formerly Xenogen) | 122796 | |
| IVIS Imaging System 200 Series | Equipment | Caliper LifeSciences | Other IVIS models that can be used include: Lumina II, Lumina XR, Kinetic, and Spectrum. |
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