β-アミロイドオリゴマーの調製 1から42までと誘導
Summary
アルツハイマー病の特徴のひとつは、Aβの上昇です。<sub> 1から42まで</sub>ペプチド。ここでは合成Aβを製造するためのプロトコルを提供<sub> 1から42まで</sub海馬長期増強、記憶の相関、細胞を損なう>オリゴマー、。この手順では、Aβ誘発性病態と薬剤スクリーニングのメカニズムを調べるのに便利です。
Abstract
シナプス結合の減損は、アルツハイマー病（AD）の初期段階で発生する微妙な健忘の変化の根底にある可能性があります。 β-アミロイド（Aβ）、ADで多量に生産さペプチドは、細胞が学習と記憶の相関長期増強（LTP）を、減少させることが知られている。確かに、Aβに起因するLTPの障害は、ADのモデルで、そのようなシナプス障害を軽減または復帰が可能なスクリーニング薬のシナプス機能障害を研究するための有用な実験パラダイムである。研究は、Aβがそのオリゴマーフォームを経由して優先的にLTP混乱をもたらすことが示されている。ここでは、オリゴマー合成の灌流による急性海馬スライスにAβ1- 42ペプチドを損なうLTPの詳細なプロトコルを提供しています。このビデオでは、我々はオリゴマーAβの調製のためのステップバイステップの手順を概説<sub> 1から42まで</sub>。その後、我々は、LTPがオリゴマーAβに曝露した海馬スライスに低減されている個々の実験に従ってください<sub> 1から42まで</sub>無Aβ対照実験でスライスと比較して<sub> 1から42まで</sub>露出が発生していた。
Protocol
Discussion
上述したように、オリゴマーAβの準備にはいくつかの問題が健常LTPになることがあります。 Aβ分解またはAβオリゴマー化の欠如が発生した可能性がありますかどうかを評価する一つの方法は、トリス – トリシンPAGE /ウエスタンブロット分析および分析超遠心を（このプロトコールに記載されていません）を使用してAβの準備を評価することです。ウェスタンブロッティングのサンプルがnon-de…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作業は、神経疾患や脳卒中のNIH国立研究所（NINDS）（NS049442）によってサポートされていました。>
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Aβ 1-42 (lyophilized) | American Peptide Co. | 62-0-80 | ||
| 1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP) | Fluka | 52517 | ||
| Dimethylsulfoxide (DMSO) | Biotium | 90082 | ||
| 50mL Polypropylene Centrifuge Tubes | Corning | 05-538-67 | ||
| 1.5ml MaxyClear microtubes Maximum recovery | Axygen | MCT-150-L-C | ||
| Phosphate-Buffered Saline pH 7.4 | Invitrogen-Gibco | 10010-023 | ||
| GASTIGHT Syringes 250 μL | Hamilton | 1725 | ||
| Bath sonicator | Branson | 3510 | ||
| Savant SpeedVac Concentrator System | Various distributors | SC 110A |
References
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