Realización y procesamiento de la PAAF de almohadilla grasa anterior de amiloide

Introducción Amiloidosis sistémica es una enfermedad muy variable que hace referencia el depósito extracelular de proteínas diferentes que se conocen colectivamente como amiloide. La deposición de estas fibrillas de amiloide con la configuración plegada beta conduce a diferentes presentaciones clínicas en función de los órganos implicados. Las manifestaciones clínicas más relevantes de la amiloidosis sistémica se observan cuando hay participación de los órganos críticos como el corazón, el hígado y / o renal. Históricamente, estos órganos que se realizará una biopsia para demostrar la presencia de amiloide. Estos procedimientos moderadamente invasivos implicaba un riesgo importante, incluida la hemorragia. Aspiración de la almohadilla de grasa ha demostrado proporcionar un método confiable y no invasivo para la detección de amiloide en la amiloidosis sistémica 1. Este procedimiento es básicamente similar a la liposucción de la grasa subcutánea en la pared anterior del abdomen con anestesia local para recuperar el tejido fibroadiposo para la evaluación de los depósitos de amiloide en la escasa pequeñas paredes de los vasos sanguíneos 2. El método más frecuentemente utilizado para la identificación de amiloide en el tejido sigue siendo la característica de manzana verde que se ve cuando birrefringencia Congo secciones teñidas de rojo se visualizan con un microscopio de luz polarizada 3. Cuando la aspiración almohadilla de grasa se lleva a cabo, Congo manchas rojas se puede hacer en cualquiera de diapositivas directamente manchado o preparaciones de células bloque del tejido adiposo aspirado. Sin embargo, los pacientes en las primeras etapas de la amiloidosis tienen depósitos de amiloide escasa, lo que reduce enormemente la sensibilidad del Congo teñidas de rojo las secciones bloque de celdas 4,5. Evaluación ultraestructural de aspirados almohadilla de grasa por microscopía electrónica tiene una mejor reproducibilidad y la mejora de la sensibilidad 4. Por lo tanto, se recomienda a presentar todos los aspirados de la almohadilla de grasa, tanto para la preparación de un bloque de celdas y para la realización de microscopía electrónica 2. Aspiración de la almohadilla de grasa es un costo relativamente bajo y método no invasivo para la obtención de tejido para el diagnóstico de la amiloidosis sistémica. En este artículo se describe el procedimiento de aspiración de grasa almohadilla junto con detalles sobre el procesamiento de muestras para enviar muestras, tanto para la tinción con rojo y la evaluación ultraestructural por microscopía electrónica. En este vídeo, se demuestra este procedimiento reproducible y fácil de recuperar el material de diagnóstico óptimo. 1. Realización de la PAAF de la almohadilla de grasa anterior A. anestesia de la zona (Figura 1 y 2) Utilizando hisopos con alcohol o el agente de limpieza de la piel preferidos por una institución en particular, limpiar la piel en el área del cuadrante inferior del abdomen lateral a la línea media y por debajo del ombligo (Figura 1). Marcar un área con forma de rombo de aproximadamente 2 x 2 pulgadas, como se muestra en la Figura 1, con un marcador. Aspirar a unos 10 ml de lidocaína al 1% con una aguja 18G. Adjunte una aguja 25G de 1 ½ pulgadas de la jeringa. Eliminar el aire atrapado tocando la jeringa en posición vertical mientras se presiona el émbolo hasta que el líquido se dispensa y no hay burbujas de aire. Anestesiar a lo largo de las fronteras de la zona ya marcada rombo, como se muestra en la Figura 2. Para empezar, la inserción de la aguja 25G debajo de la piel en el punto A y empuje con cuidado la aguja por vía subcutánea a punto X. Tire del émbolo de la jeringa para asegurarse de que no están dentro de un recipiente. A continuación, presione lentamente el émbolo para infiltrarse hasta 2,5 ml de lidocaína (alrededor de ¼ de la lidocaína en una jeringa de 10 ml) mientras se retira la aguja hasta el punto A, sin dejar la aguja sale de la piel en el punto A (figura 2a3). Con la aguja bajo la piel cambiar la dirección hacia el punto Y (figura 2a4) e introduzca la aguja por vía subcutánea a punto de Y (Figura 2b1). Al igual que antes, confirmar que la aguja no está en un recipiente y vierta aproximadamente 2,5 ml de lidocaína, mientras que poco a poco de retirar la aguja por el punto A. (Figura 2b3 través 2B4) Repita los pasos similares a partir del punto B y dispensación de lidocaína subcutánea de los puntos B y B a X a Y (Figura 2C1 través de 2d4). Evitar el sangrado en el aguijón A y B mediante la aplicación firme de la pieza de calibre estéril. Ahora puede comprobar que la zona está anestesiada por tocar ligeramente la piel dentro del rombo anestesiados por la punta / rincón de la pieza de gasa de algodón, por comparación con la piel sin anestesia adyacentes. B. Realizar la aspiración almohadilla de grasa (Figura 3) (La aplicación de anestesia local antes de la ejecución de la aspiración de la almohadilla de grasa puede ser evitada, dependiendo de las preferencias regionales e individuales. Procedimiento correctamente realizado PAAF para la aspiración anterior almohadilla de grasa se puede completar en un pinchazo. Sin embargo, dependiendo del umbral de dolor de cada paciente , las maniobras de la aguja 18G de ida y vuelta en el tejido adiposo subcutáneo es relativamente distrescantar. El método descrito aquí anestesia para lograr el efecto en sólo dos pinchazos con una aguja 25G y evita el dolor con una mejor tolerancia al procedimiento.) Ensamble 18G 1 ½ pulgadas de aguja en una jeringa de 10 ml. Monte el conjunto de jeringa con aguja en las garras de la jeringa ("agarre PAAF / pistola") para su correcta aplicación y liberación de vacío. Inserte la punta de la aguja en la grasa subcutánea en el área romboidal limpia y anestesiados (Figura 3a). Retraiga completamente el émbolo de la jeringa con la aguja que se inserta en el tejido subcutáneo para generar vacío (Figura 3b). Mantener el vacío y la maniobra de la aguja hacia atrás y adelante en varias direcciones en la grasa subcutánea (Figura 3c a través de 3i). Cada golpe debe ser el mayor tiempo posible con la longitud de la aguja seleccionados sin dejar la aguja sale de la piel. Máximo de muestreo se logra cambiando de dirección con cada golpe (Figura 3i). Es importante mantener la dirección de la aguja tangencial a la serosa y en paralelo a la superficie de la piel para evitar la punción de la cavidad peritoneal. El tejido fibroadiposo se acumula en la jeringa. Fragmentos de una vez suficiente tejido fibroadiposo (hasta 1 ml de muestra de fragmentos de sangre mezclada ricos) se recuperan, liberar el vacío y extraiga la aguja (Figura 3K). Que el paciente o el asistente de aplicar una presión firme en el ámbito del procedimiento con una almohadilla de gasa para evitar la extravasación de sangre. 2. Procesamiento de muestras Lugar por lo menos 5-6 fragmentos de tejido fibroadiposo en solución de glutaraldehído para microscopía electrónica (fig. 4B). Dependiendo del protocolo institucional, un frotis de algunos de los fragmentos de tejido fibroadiposo se puede preparar mediante la difusión de ellas entre dos diapositivas (Figura 4). El material restante se deja coagular en la jeringa (puede tardar 5-7 minutos, dependiendo del tiempo de coagulación) (Figura 4 C). Aspirar formalina al 10% en la jeringa para que el material del tejido fibroadiposo coagulada se desprendió de la pared de la jeringa y la libre flotación (Figura 4C2). Retire el émbolo de la jeringa (Figura 4C3) y transferir el tejido fibroadiposo coagulada en el recipiente de formol al 10% desde el extremo abierto de la jeringa frente al extremo de la boquilla (Figura 4C4). Etiqueta de los envases debidamente y presentar el glutaraldehído para microscopía electrónica y el formol para H & E y la sección de Congo mancha roja de evaluación en el marco de polarización microscopía. Si las manchas están preparados, pueden ser procesados ​​de acuerdo con el protocolo de cada laboratorio. Figura 1. El área a ser anestesiado por PAAF de la almohadilla de grasa anterior. Figura 2. Anestesia de la zona. Figura 3. Realizar PAAF de la almohadilla de grasa anterior. Figura 4. Procesamiento de la almohadilla de grasa anterior aspirar a ser presentada al laboratorio para la detección de depósitos de amiloide. 3. Resultados representante Figura 5. Amiloides en la pared de los vasos sanguíneos pequeños en los fragmentos de tejido fibroadiposo. Tejido fibroadiposo fue procesado en formol, embebidos en parafina, se tiñeron con rojo congo, y examinadas por microscopía óptica de polarización. Amiloides en la pared de los vasos sanguíneos pequeños muestra birrefringencia verde manzana (flecha blanca). Figura 6. Los tejidos que carecen de la amiloidosis. La birrefringencia verde manzana está ausente en los tejidos de un paciente diferente sin amiloidosis. Birrefringencia azul (flecha blanca) de las fibras de colágeno, suelen estar presentes en casi todas las muestras. Figura 7. Fibrillas de amiloide en consonancia con la pared del vaso sanguíneo. Micrografía electrónica de recto, sin ramificaciones, esparcidas al azar 8-10 fibrillas nm de diámetro formado por amiloide en la pared del vaso sanguíneo.