Executar e Processamento de FNA Pad Fat Anterior para amilóide

Introdução Amiloidose sistêmica é uma doença altamente variável que se refere à deposição extracelular de várias proteínas que são referidos coletivamente como amilóide. Deposição destas fibras de amilóide beta pregueada com configuração leva a várias apresentações clínicas dependendo dos órgãos envolvidos. As manifestações de maior relevância clínica de amiloidose sistêmica são observadas quando há envolvimento de órgãos importantes como coração, fígado e / ou renal. Historicamente, esses órgãos envolvidos seria biópsia para demonstrar a presença de amilóide. Estes procedimentos invasivos realizados moderadamente um risco significativo incluindo hemorragia. Aspiração almofada de gordura já foi mostrado para fornecer um método confiável e não-invasivos para a detecção de amilóide na amiloidose sistêmica 1. Este procedimento é essencialmente comparável à lipoaspiração da gordura subcutânea na parede abdominal anterior, sob anestesia local para recuperar o tecido fibro para avaliar depósitos de amilóide escassa nas paredes de pequenos vasos sanguíneos 2. O método mais utilizado para a identificação de amilóide no tecido continua a ser o padrão de birrefringência característica verde-maçã visto quando seções Congo manchada de vermelho são visualizadas em um microscópio de luz polarizada 3. Quando a aspiração almofada de gordura é realizada, manchas vermelho Congo pode ser feito em qualquer direta slides manchada ou preparação de um bloco de células do tecido adiposo aspirado. No entanto, pacientes em estágios iniciais de amiloidose têm depósitos de amilóide escassa, o que reduz a sensibilidade do vermelho Congo seções célula corada bloco 4,5. Avaliação ultra-estrutural dos aspirados almofada de gordura por microscopia eletrônica tem melhor reprodutibilidade e sensibilidade melhorada 4. Portanto, recomenda-se a submeter todas as aspira gordura abdominal para ambos preparação de um bloco de celas e para a realização de microscopia eletrônica de 2. Aspiração gordura abdominal é um custo relativamente baixo e método não invasivo para a obtenção de tecido para diagnosticar amiloidose sistêmica. Este artigo descreve procedimento de aspiração de gordura pad, juntamente com detalhes sobre o processamento da amostra para enviar amostra para ambos os coloração vermelho Congo e avaliação ultra-estrutural por microscopia eletrônica. Neste vídeo, demonstramos este procedimento reprodutível e simples para recuperar material de diagnóstico ideal. 1. Realizar a FNA de Pad Fat Anterior A. anestesiados da área local (Figura 1 e 2) Usando compressas de álcool ou o agente de limpeza de pele preferido por uma instituição particular, limpar a pele na área quadrante inferior do abdômen lateral à linha média e abaixo do umbigo (Figura 1). Marca uma área em forma rombóide cerca de 2 x 2 polegadas, como mostrado na Figura 1 com uma caneta de marcação. Aspirar cerca de 10 mL de lidocaína a 1% com agulha 18G. Anexar a 1 25G ½ polegadas de agulha para a seringa. Remover o ar tocando a seringa na posição vertical, enquanto pressiona o êmbolo até que o líquido é dispensado e não há bolhas de ar estão presentes. Anestesiar ao longo das fronteiras da área rombóide já está marcado como mostrado na Figura 2. Comece por inserir a agulha 25G logo abaixo da pele no ponto A e empurre cuidadosamente a agulha por via subcutânea a ponto X. Puxe o êmbolo da seringa para garantir que você não está dentro de um vaso. Em seguida, empurre lentamente o êmbolo para se infiltrar até 2,5 mL de lidocaína (cerca de ¼ da lidocaína em seringa de 10 mL) ao retirar a agulha para o ponto A, sem deixar que a agulha sair da pele no ponto A (Figura 2A3). Com a agulha ainda sob a pele mudar a direção para o ponto Y (Figura 2A4) e empurre a agulha por via subcutânea a ponto Y (Figura 2b1). Como antes, confirmar que a agulha não está em um navio e dispensar cerca de 2,5 mL de lidocaína, enquanto lentamente retirar a agulha através do ponto A. (Figura 2b3 através 2B4) Repita os passos similares a partir do ponto B e lidocaína distribuição subcutânea a partir de pontos para B X e B para Y (Figura 2c1 através 2d4). Prevenir o sangramento do pica A e B pela aplicação firme da parte calibre estéril. Você pode agora verificar que a área é anestesiada pelo tocando levemente a pele dentro do rombóide anestesiados por uma dica / canto de pedaço de gaze de algodão, comparando com a pele não anestesiados adjacentes. B. Realizar aspiração almofada de gordura (Figura 3) (Aplicação de anestesia local antes da realização de aspiração almofada de gordura pode ser ignorada, dependendo das preferências regionais e individuais. Corretamente realizada PAAF procedimento de aspiração de gordura pad anterior pode ser completado em uma picada. No entanto, dependendo do limiar de dor de cada paciente , manobras de agulha 18G e voltando para o tecido adiposo subcutâneo é relativamente distrescantar. O método descrito aqui anestesiados alcança o efeito em apenas duas picadas com agulha 25G e evita a dor com maior tolerância ao procedimento.) Montar 18G 1 ½ polegadas de agulha em uma seringa de 10 mL. Monte o conjunto da seringa de agulha nas garras seringa ("grip PAAF / pistola") para a aplicação adequada e liberação de vácuo. Insira a ponta da agulha para a gordura subcutânea dentro da área limpa e anestesiados rombóide (Figura 3a). Retrair completamente o êmbolo da seringa com a agulha inserida no tecido subcutâneo para gerar vácuo (Figura 3b). Manter o vácuo e manobrar a agulha e para trás em várias direções para a gordura subcutânea (Figura 3c através 3i). Cada curso deve ser tão longo quanto possível, com o comprimento da agulha selecionadas, sem deixar que a agulha sair da pele. Máxima de amostragem é conseguido através da mudança de direção com cada curso (Figura 3i). É importante manter a direção da agulha tangente ao serosa e paralelo à superfície da pele para evitar a perfuração da cavidade peritoneal. O tecido fibro-adiposo se acumula na seringa. Fragmentos de tecido fibro uma vez o suficiente (até 1 mL de amostra de sangue rico fragmentos mistos) são recuperados, a liberação do vácuo completamente e retire a agulha (Figura 3k). Que o paciente ou o assistente aplicar pressão firme sobre a área de processo com uma almofada de gaze para evitar o extravasamento de sangue. 2. Processamento de amostras Coloque pelo menos 5-6 fragmentos de tecido fibro-adiposo na solução de glutaraldeído para microscopia eletrônica (Figura 4B). Dependendo do protocolo institucional, um esfregaço alguns dos fragmentos de tecido fibro-adiposo podem ser preparadas por espalhá-las entre dois slides (Figura 4A). O restante do material é permitida a coagular na seringa (isso pode demorar 5-7 minutos, dependendo do tempo de coagulação) (Figura 4C). Aspirar formalina a 10% dentro da seringa para que o material de tecido coagulado fibroadiposo é desalojado da parede da seringa e flutuantes livres (Figura 4C2). Retire o êmbolo da seringa (Figura 4C3) e transferir o tecido fibro-adiposo coagulado no recipiente formalina a 10% da extremidade aberta da seringa em frente à extremidade do bico (Figura 4C4). Rotular os recipientes de forma adequada e submeter o glutaraldeído para microscopia eletrônica e do formol para a H & E seção e coloração vermelho Congo para avaliação sob microscopia de polarização. Se esfregaços são preparados, eles podem ser processados ​​de acordo com o protocolo do laboratório individual. Figura 1. Área a ser anestesiada para a PAAF de gordura abdominal anterior. Figura 2. Anestesiados da área local. Figura 3. Realizar PAAF de gordura abdominal anterior. Figura 4. Processamento de gordura abdominal anterior aspirar a ser submetida ao laboratório para detectar depósitos de amilóide. 3. Resultados representante Figura 5. Amilóide na parede dos pequenos vasos sanguíneos em fragmentos de tecido fibro-adiposo. Tecido fibro-adiposo foi formalina processados ​​parafina, incorporado, corados com vermelho Congo, e examinadas por microscopia de luz polarizante. Amilóide na parede dos pequenos vasos sanguíneos mostra birrefringência verde-maçã (seta branca). Figura 6. Tecido falta amiloidose. A maçã birrefringência verde é ausente em tecidos de um paciente diferente sem amiloidose. Birrefringência azul (seta branca) de fibras colágenas, geralmente estão presentes em quase todos os espécimes. Figura 7. Fibrilas amilóides consistente com na parede dos vasos sanguíneos. Micrografia eletrônica da reta, não-ramificadas, aleatoriamente espalhadas 80-10 nm de diâmetro fibrilas amilóides formado por na parede dos vasos sanguíneos.