Новые средства для измерения нейротрансмиссии оптически с помощью флуоресцентного аналоги дофамина.
Нервная система передает сигналы между нейронами с помощью нейромедиатора выпуска во время синаптической слияния пузырьков. Чтобы наблюдать поглощение нейромедиатора и освобождение от отдельных пресинаптических окончаний напрямую, мы создали флуоресцентного ложных нейротрансмиттеров в качестве подложек для синаптических пузырьков моноаминов транспортер. С помощью этих зондов для изображения высвобождение дофамина в полосатом теле, мы сделали несколько замечаний, относящихся к синаптической пластичности. Мы обнаружили, что фракция синаптических пузырьков освобождения медиатора в стимул зависела от частоты стимула. Кинетически различных "резерв" синаптических пузырьков населения не наблюдалось в этих экспериментальных условиях. Частотно-зависимого неоднородность пресинаптические терминалы было выявлено, что было частично зависит D2 дофаминовых рецепторов, что указывает на механизм частотно-зависимого кодирования пресинаптического выделения.
Чжан Хуэй и Нико Г. Губернатор способствовали в равной степени к этой работе.
В этом видео мы продемонстрируем метод для визуализации нейротрансмиссии оптически с помощью флуоресцентного аналоги дофамина. FFN511 это первое поколение FFNs мы разработали. Хотя он был разработан ориентации нейронов везикулярного транспортера моноаминов (VMAT2), который несет моноаминов нейротрансмиттеров из цитоплазмы в синаптические пузырьки, и, в частности этикетки допамин терминалы в полосатом теле и предполагаемой катехоламинов и / или серотонина терминалов в коре головного мозга (как показано в науке бумаги), соответствующий период загрузки имеет решающее значение для специфичности с FFN511 относительно гидрофобными. Мы обнаружили, что инкубации в течение более 40 минут приведет к обширным неспецифическим окрашивания в полосатой ломтиками. Специфичность может быть прямо определены destaining использованием высокой концентрации хлорида калия, который должен вызвать высвобождение FFN пределах функциональной синаптических пузырьков. Воздействие на квант FFN511 менее чем за 15 минут может привести к слабым флуоресцентный сигнал из-за недостаточной загрузки красителя в терминалах. В этом протоколе, мы используем 100 мкм ADVASEP-7 для удаления красителей связаны с внеклеточной ткани. Этот шаг не является необходимым, но если это не указано, смыв время в ACSF должна быть продлена. Таким образом, в зависимости от подготовки вы выбрали, вам необходимо изменить концентрацию и период загрузки, чтобы определить оптимальную маркировки.
The authors have nothing to disclose.
Д. Сеймс благодаря Г. Гарольд и Лейла Ю. Mathers благотворительный фонд и инициативы Колумбийского университета в области науки и техники.
Д. Сеймс и Д. Sulzer поблагодарить McKnight Фонд McKnight Технологические инновации в премии Neuroscience
Д. Sulzer благодаря NIDA, NIMH, и Picower и фонды Болезнь Паркинсона.
Х. Чжан благодаря NARSAD.
RH Эдвардс благодаря Майкл Дж. Фокс Фонд, Национальный Фонд Паркинсона, NIDA и NIMH.
Мы благодарим Роберта Берка для 6-OHDA инъекции, а также советы, Марк Сондерс за полезные обсуждения, Мерек Сиу для программирования анализа изображений, и Ян Schmoranzer на техническую поддержку с установкой микроскопии TIRF.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
FFN511 (8-(2-Amino-ethyl)-2,3,5,6-tetrahydro-1H,4H-11-oxa-3a-aza-benzo[de]anthracen-10-one) | Dalibor Sames’s laboratory at Columbia University | |||
ADVASEP-7 | CyDex, Overland Park, KS | AR-OA7-005 | ||
RC-27L Recording chamber | Warner Instrument | 64-0375 | ||
PELCO PrepEze 6-Well Holder | Ted Pella, Inc. | 36157-1 | For slice incubation | |
Master-8 pulse stimulator and Iso- Flex stimulus isolator | AMPI, Jerusalem, Israel |