Journal
/
Bioquímica
/
En optimerad kvantitativ pull-down-analys av RNA-bindande proteiner med hjälp av kort biotinylerat RNA
JoVE Journal
Bioquímica
This content is Free Access.
JoVE Journal Bioquímica
An Optimized Quantitative Pull-Down Analysis of RNA-Binding Proteins Using Short Biotinylated RNA
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

En optimerad kvantitativ pull-down-analys av RNA-bindande proteiner med hjälp av kort biotinylerat RNA

DOI:
10.3791/64923-v

•

07:55 min

•

February 17, 2023

•

, , , ,
1Center for Human Technology,Italian Institute of Technology (IIT), 2Department of Experimental Oncology,European Institute of Oncology (IEO), 3Department of Biology and Biotechnologies ‘Charles Darwin’,Sapienza University of Rome

Capítulos

  • 00:05Introduction
  • 00:42Total Protein Harvest and Protein Concentration Determination
  • 01:48Bead Preparation
  • 03:12Bead Loading and Protein Binding on Beads
  • 04:13Washing of Nonspecific Binders
  • 04:53Elution of Specific Binders
  • 05:39Results: Quantification and Validation of Protein Interactors of Specific RNA Sequences
  • 07:24Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Här presenterar vi en optimerad in vitro-metod för att avslöja, kvantifiera och validera proteininteraktorer av specifika RNA-sekvenser , med hjälp av totalt proteinextrakt från humana celler, streptavidinpärlor belagda med biotinylerat RNA och masspektrometrianalys.

Tags

RNA-binding ProteinsPull-down AnalysisBiotinylated RNAProtein ComplexesHEK 293T CellsLysis BufferMagnetic BeadsYeast TRNARNA Oligonucleotide

Article

Embed

ADICIONAR À PLAYLIST

Usage Statistics

Vídeos Relacionados

Isolering av hög-density lipoprotein för icke-kodande Small RNA Kvantifiering

Ett optimerat protokoll för elektroforetisk mobilitetsförskjutningsanalys med användning av infraröda fluorescerande färgämnesmärkta oligonukleotider

En effektiv metod för isolering av högrenat RNA från frön för användning i kvantitativ transkriptom analys

Rening av biotinylerade cellytaproteiner från<em> Rhipicephalus microplus</em> Epitelceller

Optimerat protokoll för extraktion av proteiner från humanmitralventilen

Provberedning för Mass Spectrometry-baserade identifiering av RNA-bindande regioner

Fånga och identifiering av RNA-bindande proteiner med hjälp av klick kemi-assisted RNA-interactome Capture (CARIC) strategi

PeptiQuick, en enstegs inkorporering av membranproteiner i biotinylerade Peptidiscs för strömlinjeformade Proteinbindnings analyser

Ubiquitin kedjeanalys genom parallell reaktionsövervakning

Tvärgående sektionering av moget ris (Oryza sativa L.) Kärnor för skanning av elektronmikroskopiavbildning med pipettespetsar som immobiliseringsstöd

Read Article