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Cell-Type Specific Protein Purification and Identification from Complex Tissues Using a Mutant Methionine tRNA Synthetase Mouse Line

Purificação e identificação de proteínas específicas do tipo celular de tecidos complexos usando uma linha de camundongo mutante de metionina tRNA sintetase

DOI:
10.3791/63713-v

•

07:39 min

•

April 13, 2022

•

, , , , , ,
1Max-Planck-Institute for Brain Research,Synaptic Plasticity Department, 2Department of Biochemistry and Molecular Biology,Veterinary School, Complutense University of Madrid

Capítulos

  • 00:05Introduction
  • 00:40Tissue Harvesting, Lysis, and Protein Extraction
  • 03:03Protein Purification
  • 05:28Results: Cell-Type-Specific Protein Labeling with Azidonorleucine
  • 06:35Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Este protocolo descreve como realizar a marcação de proteína específica do tipo celular com azidonorleucina (ANL) usando uma linha de camundongo expressando uma L274G-Metionina tRNA sintetase mutante (MetRS*) e as etapas necessárias para o isolamento de proteínas específicas do tipo celular marcadas. Delineamos duas possíveis vias de administração de ANL em camundongos vivos por (1) água potável e (2) injeções intraperitoneais.

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Cell-type SpecificProtein PurificationProtein IdentificationMutant Methionine TRNA SynthetaseCell Type Specific ProteinsIn VitroIn VivoImmunofluorescentAlkylationIodoacetamideBuffer ExchangeClick ChemistryAzidonorleucine IncorporationNeutravidin Binding

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