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Um ensaio de recuo de molécula única otimizado para quantificação da fosforilação de proteínas
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JoVE Journal Bioquímica
An Optimized Single-Molecule Pull-Down Assay for Quantification of Protein Phosphorylation

Um ensaio de recuo de molécula única otimizado para quantificação da fosforilação de proteínas

DOI:
10.3791/63665-v

•

07:45 min

•

June 06, 2022

•

, , , , , , ,
1Department of Pathology,University of New Mexico School of Medicine, 2Department of Physics and Astronomy,University of New Mexico, 3Comprehensive Cancer Center,University of New Mexico Health Sciences Center

Capítulos

  • 00:04Introduction
  • 00:53Coverslip Preparation
  • 03:18Functionalization of Array with Biotinylated Antibody
  • 04:09SiMPull of Proteins of Interest from Whole-Cell Lysates
  • 04:40Image Acquisition
  • 05:45Results: Capture of EGFR-GFP from Protein Lysates Using SiMPull
  • 07:19Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

O presente protocolo descreve a preparação da amostra e a análise de dados para quantificar a fosforilação proteica usando um ensaio de recuo de molécula única (SiMPull).

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AI-powered Protein Phosphorylation QuantificationSingle-molecule Pull-down AssaySiMPull ProtocolAntibody LabelingAutofluorescence ReductionSingle-molecule AnalysisPhosphorylation Status Of Individual ProteinsAlternative To Western Blotting And Mass Spectrometry

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