Vi presenterer en protokoll for lamellforberedelse av dypfryste biologiske prøver ved kryofokusert ionstrålemikromaskinering for høyoppløselige strukturelle studier av makromolekyler in situ med kryo-elektrontomografi. Den presenterte protokollen gir retningslinjer for fremstilling av høykvalitets lameller med høy reproduserbarhet for strukturell karakterisering av makromolekyler inne i Saccharomyces cerevisiae.