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Ein verbessertes Protokoll zur Reinigung und direkt Mono-Biotinylat Rekombinanten BDNF in einer Tube für Zelllandhandel Studien in Neuronen
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1Department of Physiology, Faculty of Biological Sciences,Pontificia Universidad Católica de Chile, 2Department of Molecular and Cellular Biology, Faculty of Biological Sciences, Center for Aging and Regeneration (CARE UC),Pontificia Universidad Católica de Chile, 3Institute of Biomedical Sciences. Faculty of Medicine and Faculty of Life Sciences,Universidad Andrés Bello, 4Department of Neuromuscular Diseases, UCL Queen Square Institute of Neurology and UK Dementia Research Institute at UCL,University College London Campus
Capítulos
- 00:00Introdcution
- 00:48Transfection of HEK293 cells
- 01:49Media Collection and Storage
- 03:02Media Concentration and Purification
- 04:58In vitro Mono-biotinylation Reaction
- 06:01Biotinylation Analysis
- 06:56Visualization of Retrograde Axonal Transport of BDNF-QD in Live Neurons
- 07:58Represetative Results
- 13:17Conclusion
Rekombinantes BDNF, das eine Avi-Sequenz (BDNFAvi) enthält, wird in HEK293-Zellen kostengünstig hergestellt und durch Affinitätschromatographie gereinigt. BDNFavi wird dann direkt mit dem Enzym BirA in einer Röhre mono-biotinyliert. BDNFavi und monobiotinyd BDNFavi behalten ihre biologische Aktivität im Vergleich zu kommerziell erhältlichen BDNF.
