Neste artigo, descrevemos, em detalhes, um protocolo para a geração de culturas neurosferas a partir de células-tronco neurais de camundongos pós-natal derivadas dos principais nichos neurogênicos do rato. As neuroesferas são usadas para identificar células-tronco neurais do tecido cerebral permitindo a estimativa de números de células precursoras. Além disso, essas estruturas 3D podem ser banhadas em condições diferenciais, dando origem a neurônios, oligodendrócitos e astrócitos, permitindo o estudo do destino celular.