Begränsning endonucleases med nytt ordnar specificitet kan framkallas från enzym som känner igen ett delvist degenererat ordnar. Här tillhandahåller vi ett detaljerat protokoll som vi framgångsrikt använde för att ändra sekvenss specificitet nlaIV enzym. Viktiga ingredienser i protokollet är in vitro-uppdelning av transkriptions-/översättningsreaktionen och valet av varianter med nya sekvenssub specificiteter.
Skowronek, K. J., Bochtler, M. In Vitro Directed Evolution of a Restriction Endonuclease with More Stringent Specificity. J. Vis. Exp. (157), e60807, doi:10.3791/60807 (2020).