Ограничение эндонуклеазы с новой специфичностью последовательности может быть разработано из ферментов, распознающих частично вырожденную последовательность. Здесь мы предоставляем подробный протокол, который мы успешно использовали, чтобы изменить специфику последовательности фермента NlaIV. Ключевыми составляющими протокола являются разобщенности транскрипции/перевода и выбор вариантов с новой последовательностью.
Skowronek, K. J., Bochtler, M. In Vitro Directed Evolution of a Restriction Endonuclease with More Stringent Specificity. J. Vis. Exp. (157), e60807, doi:10.3791/60807 (2020).