Journal
/
Genética
/
In Vitro rettet utviklingen av en restriksjon endonuclease med strengere spesifisitet
JoVE Journal
Genética
This content is Free Access.
JoVE Journal Genética
In Vitro Directed Evolution of a Restriction Endonuclease with More Stringent Specificity

In Vitro rettet utviklingen av en restriksjon endonuclease med strengere spesifisitet

DOI:
10.3791/60807-v

•

09:16 min

•

March 25, 2020

•

,
1International Institute of Molecular and Cell Biology, Warsaw (IIMCB)

Capítulos

  • 00:05Introduction
  • 00:49Split-and-Mix Synthesis of Mutagenic Primers
  • 02:34Performing Compartmentalized In Vitro Transcription-translation Reaction
  • 05:07Continued Processing of Libraries and Selection
  • 07:20Results: Examples of Screening of NlaIV Variants for Sequence Specificity Alteration
  • 08:16Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Begrensning endonucleases med ny sekvens spesifisitet kan utvikles fra enzymer gjenkjenne en delvis degenerert sekvens. Her gir vi en detaljert protokoll som vi med hell brukte til å endre sekvensspesifisiteten til NlaIV-enzymet. Viktige ingredienser i protokollen er in vitro compartmentalization av transkripsjon / oversettelse reaksjon og valg av varianter med nye sekvens spesifisiteter.

Tags

Keywords: In Vitro Directed EvolutionRestriction EndonucleaseSequence SpecificityIn Vitro CompartmentalizationDirected EvolutionSubsaturation MutagenesisOligonucleotide SynthesisOil Surfactant MixtureLibrary Preparation

Article

Embed

ADICIONAR À PLAYLIST

Usage Statistics

Vídeos Relacionados

check_url/pt/60807?article_type=v

Design og bruk av en lav pris, Automated Morbidostat for Adaptive Evolution of Bakterier Under Antibiotika Drug Selection
check_url/pt/60807?article_type=v

Prosedyre for Adaptive Laboratory Utviklingen av mikroorganismer ved hjelp av en kjemostat
check_url/pt/60807?article_type=v

Genome Redigering og Regissert Differensiering av hPSCs for Henting Lineage Determinanter i Human bukspyttkjertelen Development
check_url/pt/60807?article_type=v

Kvantifisering av informasjonen kodet av Gene Expression nivåer under levetid modulering Under bredt kosttilskudd restriksjon i C. elegans
check_url/pt/60807?article_type=v

Generering av en gen-forstyrret Streptococcus mutans belastning uten Gene kloning
check_url/pt/60807?article_type=v

Testing Multicopy plasmider rolle i utviklingen av antibiotikaresistens
check_url/pt/60807?article_type=v

Genomet hele overvåking av transkripsjon feil i eukaryote organismer
check_url/pt/60807?article_type=v

Produsere Gene slettingene i Escherichia coli av P1 signaltransduksjon med Excisable antibiotikaresistens kassetter
check_url/pt/60807?article_type=v

Bruke i Vitro og i celle form å undersøke små molekyl indusert Pre-mRNA strukturelle endringer
check_url/pt/60807?article_type=v

Bruke Sniper-Cas9 å minimere Off-målet effekter av CRISPR-Cas9 uten tap av på målet aktivitet Via regissert evolusjon

Read Article